冬虫夏草菌丝体发酵液中多糖的分离纯化与含量测定

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1、冬虫夏草菌丝体发酵液中多糖的分离纯化与含量测定【摘要】　　［目的］从冬虫夏草菌丝体发酵液中提取，分离虫草多糖，并建立样品中多糖的含量测定方法。［方法］采用D101大孔树脂分离冬虫夏草菌丝体发酵液中的多糖；采用苯酚-硫酸法测定样品中多糖含量。［结果］虫草多糖的得率为142g/L；样品中虫草多糖的含量为706%。［结论］方法简便，准确，重现性好，可用于冬虫夏草菌丝体发酵液中虫草多糖的提取纯化和含量测定。【关键词】冬虫夏草菌丝体发酵液多糖大孔树脂分离纯化含量测定　　Separation,PurificationandContentTestofPolysaccharidein

2、ZymoticFluidofCordyceptsMycelium　　Abstract：［Objective］ToextractandseparatepolysaccharidefromCordycepsmycelium,andestablishcontenttestmethodofpolysaccharideinsample.［Method］TakeforamenmagnumresinD101toseparatepolysaccharidefromthezymoticfluidofCordycepsmycelium,thephenol-SO2methodtomeasure

3、polysaccharideinsample.［Result］TherecEivingrateofpolysaccharidesample.［Conclusion］Thesaidmethodissimple,convenient,correct,canbeusedforseparation,purificationandcontentmeasurementofpolysaccharidefromthezymoticfluidofCordycepsmycelium.　　KeyoticfluidofCordycepsmycelium;polysaccharide;forame

4、nmagnumresin;separationandpurification;contentmeasurement　　冬虫夏草(Cordyceps)为麦角菌科真菌冬虫夏草菌Cordycepssinensis（Berk.）Sacc.寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体，是高级滋补药品和名贵中药材。随着它的药用价值不断增大和药用范围的不断扩大，对虫草的需求量也在不断的增加。但是，由于天然虫草严格的寄生性及生长环境的特殊，且因人为因素的破坏，导致产量急剧下降，远远不能满足市场的需求。因此，从20世纪70年代起，人类就开始利用现代生物发酵技术培育虫草菌丝体［1］来代替

5、天然虫草，但是，目前对虫草菌丝体发酵液的开发利用，国内外还是鲜有报道。大孔吸附树脂是20世纪60年代发展起来的新型精制方法［2］。它是一种不含交换基团，具有大孔结构的高分子材料。自从问世以来，已在环保、化工、医药等领域［3］得到广泛利用。本研究采用D101大孔吸附树脂从虫草菌丝体发酵液中分离虫草多糖，且用苯酚-硫酸法测定了样品中多糖的含量，结果表明：本方法操作简单，结果准确，重现性好，为进一步的研究开发提供了依据。　　1仪器、材料、试剂与样品　　11仪器与材料TD5AL，用80%乙醇沉淀3次，室温下放置24h，离心15min（3000r/min），弃去上清液，取沉淀物

6、，减压干燥，得粗多糖219g。　　22虫草粗多糖纯化取上述粗多糖219g，加水66mL溶解，取水溶液，采用sevag法［4］（1/5体积的氯仿，及1/5体积的正丁醇，剧烈震荡，静置分层后，过滤，取水层）去除蛋白质，操作3次后，将水层减压蒸干，用95%乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤粗多糖，减压干燥，得纯化粗多糖184g。　　23虫草多糖精制　　231树脂预处理［5］取市售D101大孔吸附树脂，用乙醇加热回流洗涤，至洗脱液蒸干后无残留物，反复洗脱保存备用。　　232装柱以乙醇湿法装柱，用纯乙醇反复洗脱，至洗脱液与水混合不呈白色混浊为止（取1mL乙醇液加5mL水），再

7、以蒸馏水洗脱至洗脱液无醇味，备用。　　233精制将纯化的粗多糖溶解(上样量∶树脂量=1∶8~10)加到已处理好的D101大孔吸附树脂柱上，先用水洗脱至洗脱液无色，流速约为1mL/min，再用5倍量柱体积的30%乙醇、5倍量柱体积的50%乙醇洗脱，流速约为1mL/min，分别收集洗脱液。最后用95%乙醇洗脱至树脂无色，备用。斐林反应［6］表明：多糖主要集中在水洗脱部位，浓缩水洗脱液后得到精制多糖104g，得率为142g/L。　　24样品中虫草多糖的含量测定　　241对照品溶液的制备取于105℃干燥至恒重的葡糖糖对照