猴头菇菌丝体和发酵液中多糖的含量测定

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1、猴头菇菌丝体和发酵液中多糖的含量测定刘晓明1，闫云宇2，毕华3(1，3河北省食品药品检验院，2河北省医科大学第三医院，石家庄市050000)猴头菌Hericiumerinaceus(Bull.ExFr.)又名猬菌、刺猬菌、小刺猴头、猴菇、猴头菇，隶属于担子菌门,齿菌科［1］，是著名的药食两用菌。猴头菇,味甘，性平,归脾、胃经。猴头菇多糖是猴头菌的主要活性成分之一,具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、降血脂、降血糖、抗突变、防辐射等作用[2]。猴头菇多糖制成的药物和保健品深受人们喜爱，开发前景广阔。目前，通过猴头

2、菇子实体提取猴头菇多糖的方法研究较多，但猴头菇子实体的生长周期相对较长，本文研究的是发酵的方法获得的多糖，具有生长周期短，提取多糖速度快的特点。因此，液体深层发酵是开发猴头菇活性成分的有效手段。但是在发酵获得多糖的方法中，采用菌丝体提取多糖的研究较多，而积极利用发酵液提取多糖的方法较少报道，本实验通过对猴头菇菌丝体和发酵液提取的多糖含量进行比较，把发酵液也积极的利用起来，为猴头菇多糖更好的开发利用打下基础。1仪器与试药紫外可见分光光度仪GBCCintra10（澳大利亚GBC公司），高效液相（美国Water

3、s公司），旋涡混合振荡器(江苏海门其林医用仪器厂)，恒温水浴锅(北京靖卫科学仪器厂)。D－无水葡萄糖（中国药品生物制品检定所），蒽酮（北京金龙化学试剂有限公司），浓硫酸、95%乙醇、氯仿均为分析纯，猴头菇菌种为本实验室保存。2方法与结果2.1多糖的提取与精制：2.1.1猴头菇菌丝体的多糖提取［3］：取猴头菇成熟的菌丝体粉末20100505、20100506、20100507、20100508、20100509批各5g，加入20倍的水在80℃水浴中提取3小时，5000r/min离心10分钟［2］，取上清液。

4、60℃下减压浓缩至30ml，过滤，滤液离心，取上清液，加入5倍体积的无水乙醇，静置过夜。抽滤，沉淀经无水乙醇、丙酮洗涤，置干燥箱中60℃干燥，得粗多糖。2.1.2猴头菇菌丝体发酵液的多糖提取：取猴头菇成熟的菌丝体发酵液20100505、20100506、20100507、20100508、20100509批，过滤，滤液离心，取上清液1000ml。60℃下减压浓缩至300ml，过滤，滤液离心，取上清液，加入5倍体积的无水乙醇，静置过夜。抽滤，沉淀经无水乙醇、丙酮洗涤，置干燥箱中60℃干燥，得粗多糖。2.1溶

5、液的制备2.2.1葡萄糖对照品溶液的配制：精密称取105℃干燥至恒重葡萄糖标准品25mg用蒸馏水定容于50ml容量瓶中，制成浓度为0.5mg•mL-1的对照品溶液，备用。2.2.2蒽酮－硫酸溶液的配制：取98%硫酸和蒸馏水适量，配制成72%硫酸液，精密称取蒽酮适量，用72%的硫酸溶液配制成含蒽酮0.1%的蒽酮－硫酸溶液。2.3吸收波长选择：取对照品适量配制成浓度为30mg•mL-1的溶液。再取样品猴头菇多糖适量配制成浓度约为30mg•mL-1的溶液。对照品、样品溶液各取1ml分别加入4ml0.1%蒽酮－硫

6、酸液，摇匀，置沸水中煮沸10分钟，取出迅速放冷，在黑暗中放置10分钟。显色后将葡萄糖对照品、猴头菇多糖样品在紫外分光光度仪中分别在450～750nm波长范围内扫描，结果猴头菇多糖样品和葡萄糖对照品最大吸收波长分别在625.2nm和625.8nm，故选定625+1nm为测定波长。2.4标准曲线的制备：精密称取葡萄糖对照品配成0.5mg•mL-1的溶液，从中分别吸取0ml（空白），0.4ml，0.8ml，1.2ml，1.6ml,2.0ml置于10ml容量瓶中用蒸馏水定溶至刻度，配制成浓度为0mg•mL-1,2

7、0mg•mL-1，40mg•mL-1，60mg•mL-1，80mg•mL-1,100mg•mL-1的溶液，作3组与此同样的平行样品。精密吸取每组中各个浓度对照品溶液1ml分别置于试管中，照2.3项下显色方法显色，在625nm波长处测定吸光度值，计算得回归方程：y=0.007x-0.0133,R2＝0.999。结果表明，葡萄糖液在20～100mg•mL-1与吸光度值呈良好的线性关系。根据测定结果计算标准曲线方程。本方法适用于测定浓度在20～100mg•mL-1的猴头菇多糖。2.5精密度试验：精密称取0.15

8、72g样品，定容于100ml容量瓶中，待溶解完全后，精密量取1ml定溶于10ml容量瓶中，再取1ml于试管中，共配制5份同样的稀释液，按标准曲线项下操作。结果RSD为0.13%（n=5），表明精密度良好。2.6稳定性实验：取同一份供试品（A）和对照品（B）溶液，按标准曲线项下操作，进行紫外测定。每隔15分钟测定一次紫外吸收值，样品的RSD值为0.74%（n=8）,对照品的RSD值为0.50%（n=8）。由实验结果可知，此方法在