发酵液溶磷含量测定.doc

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1、编　号共4页制订人制订日期审核人审核日期批准人批准日期颁发部门　质量管理部实施日期发酵液溶磷含量测定SOP一、目的：制订发酵液溶磷含量测定标准操作规程，确保发酵液中溶磷含量检测的准确。二、适用范围：适用于公司发酵液溶磷含量的检验。三、责任者：质量检验部QC操作人员四、内容：1、原理：正磷酸盐在酸性溶液中与钼酸铵反应生成磷钼酸铵，再用抗坏血酸使之还原成低价的钼蓝，此蓝色溶液符合比尔定律。2、仪器：电子分析天平分光光度计恒温水浴埚容量瓶刻度吸管3、磷标准溶液配置取一定量KH2PO4(A.R)置于称量瓶内，在105℃干燥至恒重，精密称取0.439克，加水溶解

2、，加入1mL硫酸，于100mL容量瓶中定容至刻度，摇匀，即得1mg/mL磷标准溶液。有效期10天。准确吸取上述磷标准溶液1mL于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，即得10ug/mL磷标准溶液。此标准溶液现配现用。4、定磷试剂配制：将下述溶液3mol/L硫酸、水、2.5%钼酸铵、10%抗坏血酸按体积比1∶2∶1∶1的比例混匀即得。现配现用。5、绘制磷标准曲线取7支试管，分别按下表加入各试剂，充分摇匀，45℃水浴20分钟，冷却至室温，按照《分光光度计校准使用SOP》在660nm波长下测量其OD值。以溶液磷含量为纵坐标，OD值为横坐标，绘制标准曲线，

3、得到回归方程。管号012345610ug/mL磷标准溶液（mL）00.51.01.52.02.53.0溶液磷含量（ug）051015202530水（mL）3.02.52.01.51.00.50定磷试剂（mL）3.03.03.03.03.03.03.0线性回归系数≥0.9996、样品磷含量检测取发酵液离心后上清液0.1mL，至试管中，加2.9mL水，再加入定磷试剂3mL，振摇，于45℃水浴20分钟，冷却至室温，以空白做对照，4按照《分光光度计校准使用SOP》于660波长测OD值。5计算：根据磷标准曲线以及稀释倍数计算磷含量(ug/mL)。五、文件发放范围

4、公司生物产业部质量管理部1份，质量检验部2份，产业部相关领导每人1份，存档2份。六、变更记录：上版文件编号上版文件实施日期本次变更原因、依据及详细变更内容SL-QAD-248-002003.02.10采用新版格式和编号，增加文件修订内容SLB-QC-010-012006.08.19增加了定磷试剂的配制、标定方法、标定记录，规定了定磷试剂的有效期4磷标准曲线绘制记录批号：编号：SLB-QC-010-02R1磷标准溶液配制：（天平编号：）精密称取0.439克于105℃干燥至恒重的磷酸二氢钾，加水溶解，加入1mL硫酸，于100mL容量瓶中定容至刻度，摇匀，即

5、得1mg/mL磷标准溶液。有效期10天。配制人：配制日期：年月日准确吸取上述磷标准溶液1mL于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，即得10ug/mL磷标准溶液。现配现用。配制人：配制日期：年月日定磷试剂配制：将下述溶液3mol/L硫酸、水、2.5%钼酸铵、10%抗坏血酸按体积比1∶2∶1∶1的比例混匀即得。现配现用。试剂取用数量:3mol/L硫酸水2.5%钼酸铵10%抗坏血酸配制人：配制日期：年月日磷标准曲线的绘制：（分光光度计编号：）取7支试管，分别按下表加入各试剂，充分摇匀，45℃水浴20分钟，冷却至室温，于660nm波长处分别测溶液OD值。

6、以溶液磷含量为纵坐标，OD值为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程。管号012345610ug/mL磷标准溶液（mL）00.51.01.52.02.53.0水（mL）3.02.52.01.51.00.50定磷试剂（mL）3.03.03.03.03.03.03.0测得溶液OD值为：管号0123456溶液磷含量（ug）051015202530OD值线性回归方程（磷标准曲线）为：线性回归系数应≥0.999线性回归系数为：符合规定□不符合规定□标定人：标定日期：年月日复核人：日期：年月日4发酵液溶磷检验记录编号：SLB-QC-010-02R2品名：批号：操作步骤

7、：取发酵液离心上清液0.1mL至试管中，加2.9mL水，加定磷试剂3mL，振摇，于45℃水浴20分钟，冷却至室温，以空白做对照，按照《分光光度计校准使用SOP》于660nm波长处测溶液OD值。根据磷标准曲线以及稀释倍数计算溶磷含量。计算：溶磷含量（ug/mL）＝磷标准曲线：年取样时间生长时间OD660值溶磷含量（ug/mL）检验人复核人月日4