高血压血瘀证血管紧张素转换酶基因插入或缺失的多态性分析论文

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1、高血压血瘀证血管紧张素转换酶基因插入或缺失的多态性分析论文骆杰伟陈慧吴小盈林慧中陈燕李德育沈晓丽伍严安【摘要】【目的】探讨血管紧张素转换酶（ACE）基因插入或缺失（I/D)的多态性与原发性高血压血瘀证的关系。【方法】选择原发性高血压(EH)血瘀证组100例、非血瘀证组120例和正常对照组100例，采用聚合酶链反应(PCR)方法检测ACE基因I/D多态性。【结果】高血压血瘀证组的DD基因型及D等位基因频率(分别为0410和0590)高于高血压非血瘀证组(分别为0250和0467)和正常对照组(分别为0220和0455)(Ｐ＜００５或Ｐ＜

2、００1)，高血压非血瘀证组与正常对照组比较无显著性差异(Ｐ＞００５)。【结论】ACE基因插入或缺失(I/D)多态性与血瘀证具有相关性，D等位基因可能是血瘀证的易感基因之一。【关键词】高血压/遗传学；血管紧张素转换酶；基因；血瘀/遗传学【Methods】TheACEgenetypein100EHpatientsinedbypolymerasechainreaction(PCR)assay.【Results】IncidencesofDDgenotypeandDallelegenotypeofACEgeneorphismofACEgenehasare

3、lationshipaybethesusceptiblegeneofEHpatientsmHg，舒张压(99±733)mmHg。(2)EH非血瘀证组120例，其中男78例,女42例；年龄(582±1026)岁。吸烟者26例，BMI为2399±368；收缩压(162±1565)mmHg，舒张压(98±960)mmHg。(3)正常对照组100例,男66例,女34例；年龄(568±1082)岁；吸烟者21例，BMI为2392±379；收缩压(122±1672)mmHg，舒张压(73±595)mmHg。家族中一级亲属无EH病史,.

4、freelL抽提DNA,DNA抽提试剂盒系基因公司的QIAGENDNA全血抽提试剂盒。采用聚合酶链反应(PCR)方法。引物设计为：上游5CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT3,下游5GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT3［4］。引物合成由上海博亚生物工程有限公司完成。反应总体积为25?μL，EXTaqDNA聚合酶购自大连宝生物公司。采用eppendorfPCR仪进行扩增,设置预变性温度95?℃、5?min；95?℃、30?s；58?℃、30?s；72?℃、50?s；共30个循环,最后72?℃延伸5min,

5、反应产物在25?g/L的琼脂糖凝胶中电泳,DNA在溴化乙锭(EB)染色紫外灯下观察拍照。DNA对照品(marker)购自大连宝生物公司。23统计学处理采用SPSS?120统计软件进行数据的统计分析。3结果31ACE基因型PCR扩增结果位于ACE基因第16内含子的I/D多态性，可扩增出两种长度片段,即490?bp的为插入(I)片段，190?bp的为缺失(D)片段。仅有490?bp为II型,仅有190?bp为DD型,两种均有的为ID型(见图１)。323组间ACE基因及等位基因的频率分布比较从表1可见，高血压血瘀证组的DD基因型及D等位基因频率

6、(分别为0410和0590)显著性高于高血压非血瘀证组(0250和0467)和正常对照组(0220和0455)(Ｐ＜００５或Ｐ＜００1)，高血压非血瘀证组DD基因型及D等位基因频率与正常对照组均无显著性差异(Ｐ＞００５)。M.Marker；3、7.ACE基因DD型(DDgenotype)；4、6、8.ACE基因II型(IIgenotype)；1、2、5、9.ACE基因ID型(IDgenotype)图1ACE基因型PCR扩增电泳图略表1各组ACE基因型及等位基因频率比较略4讨论ACE是RAS酶(或底物)级联关键酶之一，其ACE基因I

7、/D多态性在心血管病等方面的研究受到普遍关注，目前大多学者研究认为EH与ACE基因I/D多态性无关，从本研究结果看,非血瘀证高血压组的DD基因型及D等位基因频率与正常对照组间无显著性差异，也提示二者关系不密切。但结果同时显示，高血压血瘀证组的DD基因型和等位基因频率均显著性高于高血压非血瘀证组和正常对照组，说明ACE基因I/D多态性与血瘀证相关，并提示D等位基因可能是血瘀证的易感基因，这一结果与毛以林等［5］在冠心病患者中发现DD型ACE基因可能为冠心病血瘀证发病的易感基因的结果相似。在典型的血瘀证中，如高血压病的并发症心肌梗死、脑梗死等与ACE基

8、因I/D多态性研究较多，从Cambien等［6］最早认为ACE的DD型基因是心肌梗死的潜在危险因素,随后有研究表明该基因多