脑出血患者血管紧张素转换酶i-d的基因多态性分析

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1、脑出血患者血管紧张素转换酶I/D的基因多态性分析：孙洪英和姬苓杨月明袁利和程景丽【摘要】目的：探讨脑出血（ICH）患者血管紧张素转换酶（ACE）I/D基因多态性,并分析其是否有致脑出血效应。方法：应用聚合酶链式反应-限制性片断长度多态性（PCR-RFLP）技术检测80名ICH患者和90名健康对照者的ACE基因型和等位基因，并用Logistic回归分析其致脑出血的效应。结果：170例样本中ICH组ACEDD基因型频率为35.0%，D等位基因频率51.9%，明显高于正常对照组（P＜0.05）；经Logistic回归分析，ACEDD基因型发病的相对危险度（OR）为2.923，与ACE非D

2、D基因型OR值0.582相比差异有统计学意义（P<0.05），ACEDD基因型增加脑出血发生的概率。结论：ACEI/D基因多态性可能是ICH发病的独立遗传因素。【关键词】脑出血；血管紧张素转换酶；基因多态性　　AbstractObjective:ToidentifyanangiotensinI-convertingenzyme(ACE)genepolymorphismsofthepatientsorrhageandanalyzeitscausativeeffectonintraacerebralhemorrhage.Methods:ACEgenotypesinedethodo

3、fPCR-RLFPin80patientsorrhage(ICH)and90age-matchedcontrols.IndependentfatalnessofACEgenotypesandallelestoorrhagearkablyhigherthanthatinthecontrolgroup(P<0.05).LogisticregressionanalysisshoorphismofACEI/DisrelatedtotheincidenceofICHandmaybetheindependentriskfactorforintracerebralhemorrhage.　　

4、Keyorrhage;ACE;Genepolymorphism　　人类疾病除外伤外几乎都存在遗传与环境因素的相互作用，仅是二者所占比重不同［1］。脑出血(intracerebralhemorrhage,ICH)的发生同样也受到环境与遗传因素的双重影响。目前有研究关注于ACE基因I/D多态性与脑梗死的关系，而ACE基因I/D多态性在ICH发病中的作用的研究报道少见。因此本研究运用聚合酶链反应及酶切结合银染色技术检测ICH患者ACE基因I/D多态性，探讨ACE基因多态性与ICH的关系。　　1对象与方法　　1.1对象ICH组：随机选择2004年1月至2007年3月包头医学院第一附属医院神

5、经内科就诊的ICH患者80例,男42例，女38例；年龄60～78岁,平均66.4岁，符合全国第四届脑血管病学术会议修订的诊断标准，并经头部CT和/或MRI证实。正常对照组：为同期本院健康体检者90名,男46名，女44名，年龄60～71岁,平均65.7岁，均经过临床和/或影像学检查排除ICH。两组的年龄、性别、体重指数（BMI）经比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。　　1.2方法　　1.2.1DNA样品的提取采集研究对象的周围静脉血2mL，储存于EDTA-Na2抗凝管，常规酚/氯仿抽提方法提取基因组DNA备用。　　1.2.2ACEI/D基因多态性的检测采用PCR技术，引

6、物设计参照文献［2］，上游序列为5’-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3’,下游序列为5’-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3’。反应在PCR扩增仪（BiometraPC48型）上进行，制备好的模板DNA3μL,加入PCR反应混合液，反应体系25μL，含引物各0.7μL，2×PfuPCRMasterMix12.5μL。混匀后，液体石蜡封顶进行PCR反应，预变性94℃2分钟，变性94℃30秒，退火55℃45秒，延伸72℃60秒，共35个循环，最后72℃延伸5分钟，扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，紫外灯下观察结果。　　1.2.3统计学方

7、法全部数据应用SPSS11.5软件包进行分析。基因型分布及等位基因频率应用基因计数法并通过χ2检验，基因型及等位基因相对风险率Logistic回归分析后以比值比及95%可信区间表示。　　2结果　　2.1分型人群中有3种ACE基因型：长度为490bpII纯合型、490/190bpID杂合型和190bpDD纯合型，见图1。　　（M：Marker；1、2：ID；3、4：II；5：DD）　　图1ACEPCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳（略）　　2.2两组ACE基因型及等位基因频率分