高效液相色谱法检测加味芍药甘草颗粒中芍药苷、甘草酸的含量论文

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1、高效液相色谱法检测加味芍药甘草颗粒中芍药苷、甘草酸的含量论文【摘要】【目的】建立加味芍药甘草颗粒中芍药苷及甘草酸的含量测定方法。【方法】采用反相高效液相色谱法，色谱条件：乙腈(A)-10g/L冰醋酸水溶液(B)(调pH35)，流速10mL/min；检测波长250nm,.freelin，体积分数19%~29%A、6~10min，体积分数30%~45%A、11~25min(A+B=100%)。【结果】芍药苷及甘草酸分别在1916～1226、2625～168μg/mL范围内成良好线性关系,平均回收

2、率芍药苷为10112%，甘草酸为9968%。【结论】本测定方法简便可行、重复性好，可用于加味芍药甘草颗粒中有效成分芍药苷和甘草酸的含量测定。【关键词】加味芍药甘草颗粒/化学；芍药苷/分析；甘草酸/分析；色谱法.freelmitP680A型高效液相色谱仪、SummitP680A型低压四元泵、PDA100ASI100自动进样器、Summit柱温箱以及“变色龙”色谱工作站均由德国戴安中国有限公司提供；Sartorius十万分之一电子天平由德国赛多利斯公司提供。12药物与试剂加味芍药甘草汤颗粒（批号分

3、别为20070217、20070520、20071023）购自天津泰达药业有限公司；芍药苷和甘草酸对照品均购于中国药品生物制品检定所(批号分别为110736200629、110731200408)；乙腈为色谱纯；冰醋酸为分析纯。2方法和结果21色谱条件色谱柱：DiamonsilC18(46mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈(A)-10g/L冰醋酸水溶液(B)(调pH35);流速为10mL/min；检测波长为250nm；柱温为室温；进样量20μL。梯度洗脱程序：体积分数18%A、DIS

4、EASEMODELS,ANIMAL;RATS0~5min，体积分数19%～29%A、6～10min，体积分数30%～45%A、11～25min(A+B=100%)。在此条件下芍药苷、甘草酸与其他组分能达到较好分离，分离度均大于15，理论塔板数均大于5000（见图1～4）。22标准品溶液的制备及线性关系的考察精密称取芍药苷对照品1226mg置10mL量瓶中，用体积分数35%乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成质量浓度为1226mg/mL的芍药苷对照品贮备液；精密称取甘草酸对照品84mg置25mL

5、量瓶中，用体积分数35%乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成质量浓度为0336mg/mL的甘草酸对照品贮备液。精密量取芍药苷对照品贮备液10mL、甘草酸对照品贮备液50mL置10mL量瓶中，用体积分数35%乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成含芍药苷、甘草酸质量浓度分别为01226、0168mg/mL的混合对照品溶液，作为线性1号工作液。23供试品溶液的制备精密称取加味芍药甘草颗粒粉末10g。置100mL具塞三角瓶中，精密加入甲醇250mL，密塞，称定质量，超声提取30min，室温放置30

6、min后，以甲醇补足损失的质量，摇匀，滤过；精密量取续滤液10mL置10mL量瓶中用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。24阴性对照品溶液的制备阴性对照溶液的制备按照22项下方法分别制备缺白芍、缺甘草的加味芍药甘草颗粒阴性样品。25精密度试验取对照品溶液重复进样6次，每次20μL。测得芍药苷、甘草酸峰面积sR分别为093%、075%。26稳定性试验精密吸取供试品溶液20μL，重复进样6次，每次间隔2h，测得芍药苷、甘草酸峰面积sR分别为055%、062%，结果表明样品中芍药苷、甘草酸在12h

7、内稳定。27重复性试验按拟定的含量测定方法，取同一样品溶液（批号：20060217），平行制备6份，测得峰面积并计算含量，结果测得芍药苷、甘草酸含量的sR分别为097%、109%。28加样回收率试验分别精密称取6份已测得芍药苷、甘草酸含量的加味芍药甘草颗粒（批号：20060217）各1g，加入芍药苷、甘草酸对照品液，混匀，按照23项下供试品溶液制备方法制备，进样分析计算结果。结果表明芍药苷、甘草酸的平均回收率分别为10112%(sR为106%)、9968%(sR为109%)，结果见表

8、1、表2。表1芍药苷加样回收率试验表2甘草酸加样回收率试验29含量测定结果按供试品溶液制备方法和色谱条件对3批样品进行了测定，结果见表3。表3样品含量测定结果3讨论《中国药典》以流动相：甲醇－02mol/L醋酸铵溶液－冰醋酸（67∶33∶1）超声提取得甘草酸，以稀乙醇超声提取芍药苷［4］。在预试验中，我们对比3种溶剂体系及经过不同的提取时间（20、30、40、60min）所提取的成分与含量，结果表明，超声提取30min（功率240in；回收率结果表明