电离辐射对人乳腺癌细胞fgfr2基因表达的影响论文

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1、电离辐射对人乳腺癌细胞FGFR2基因表达的影响论文.freelRNA表示水平的改变。结果2和4Gy的X射线照射，FGFR2基因的表达较对照组明显降低，随后随剂量的增加表达量又逐渐上升。结论电离辐射在低剂量组2和4Gy使乳腺癌细胞FGFR2基因表达降低，随后又逐渐上升。【关键词】乳腺癌电离辐射成纤维细胞生长因子受体2（FGFR2）乳腺癌是女性健康的一大杀手，全球每年有约50万妇女死于这种癌症。在我国，其人群发病率为23/10万.freela公司购得。1.2方法1.2.1细胞培养人类乳腺癌MDA-MB-231细胞培养在含10%小牛血清、青霉素100U/ml、庆大霉素100U/

2、ml的DMEM培养基中。细胞培养在37℃、5%CO2、饱和湿度条件下。取对数生长期MDA-MB-231细胞，以5×105密度将细胞接种至50ml的培养瓶中，等细胞生长至60%左右，采用0；2；4；6；8和10Gy六个不同剂量的X射线照射处理，照射24小时后收集样品。1.2.2RT-PCR收集细胞，按Trizol试剂盒的说明书提取总RNA，紫外分光光度计分别测定RNA浓度和纯度（A260/A2801.90）。各取总RNA5μl，加入1μlOligo(dT)，10μlDEPC水，70℃水浴5分钟，冰浴冷却30秒。然后在冰上加入4μl5x反应液，1μlRNase抑制剂(20U/

3、μl)，2μldNTP混合液(10mmol/L)，在37℃水浴加热5分钟。加入1μlM-MuLV反转录酶(20μg/μl)，在37℃逆转录1小时，最后在70℃灭活逆转录酶10分钟，-20oC冰箱保存备用。根据FGFR-2基因序列，采用primerpremier5软件进行引物的设计。引物序列分别为上游引物5’-CCCATCTGACAAGGGAAAT-3’，下游引物为5’-TCTGGCGAGTCCAAAGTC-3’，扩增产物为500bp。GADPH上游引物为5′-CAACTACATGGTCTACATGTTCC-3′，下游引物为5’-CAACCTGGTCAGTGTAG-3’，扩

4、增产物为700bp。反应条件为：48℃逆转录45分钟；94℃灭活及预变性2分钟；再经58℃45秒，72℃45秒，反应35个循环，68℃延伸7分钟。最后，PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳，40V条件下1小时，在凝胶成像仪（Bio-Rad）上观察并拍照。2结果X射线照射24h后，人类乳腺癌MDA-MB-231细胞FGFR2基因表达剂量依赖关系。如图所示：给予2、4、6、8、10GyX射线照射后，FGFR2的基因表达与对照组相比在低剂量组（2和4Gy）明显降低，此后又略有上升，但总体上表现为降低。说明X射线照射可抑制FGFR2基因的表达，在低剂量时更为明显。。图1.MDA-MB-

5、231细胞的FGFR2基因RT-PCR产物的聚丙烯酰胺凝胶电泳（0为对照组，2，4，6，8，l0Gy分别为不同的照射剂量。收集呈对数生长的细胞并按“材料和方法”中所描述的RT-PCR法测定FGFR2mRNA的表达水平。本实验重复三次。GADPHmRNA同时测定作为样本间的对照）3讨论成纤维细胞生长因子受体(FibroblastGroRNA表达的影响。结果显示在低剂量组2和4Gy，FGFR2基因表达明显降低，此后又略有上升，但总体上表现为降低。说明X射线照射可抑制FGFR2基因的表达，在低计量时更为明显。由于乳腺癌的发生是一个极其复杂的过程，受到诸多癌基因的调控。尽管X射线

6、可使FGFR2mRNA表达水平下调，但电离辐射在治疗乳腺癌过程中同时改变其他基因的表达。因此电离辐射用于治疗乳腺癌的确切机制仍有待进一步研究。