fak基因表达对人结直肠癌细胞增殖及运动的影响的论文

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1、FAK基因表达对人结直肠癌细胞增殖及运动的影响的论文【摘要】目的:探讨黏着斑激酶(fak)表达水平对结直肠癌细胞增殖及运动的影响。方法:针对fak基因不同靶点设计sirna序列,构建sirna重组子,转染caco2细胞,以rtpcr和免疫细胞化学方法检测fakmrna和蛋白表达变化及时间效应,同时检测fak基因敲低对caco2细胞的凋亡、增殖及迁移的影响。结果:faksirna导入caco2细胞后,fakmrna和蛋白表达水平明显下调,细胞增殖及迁移能力受抑,呈时间依赖关系,fakmrna水平下调在转染后48h达到最大。结论:faksirna可有效抑制靶基因表达,fak表达水平下调后c

2、aco2细胞的增殖及运动明显受抑制。【关键词】小干扰rna;结直肠癌;fak;细胞增殖;细胞运动effectsoffakexpressionlevelonproliferationandmotilityofcolorectalcarcinomacells　　panning,zhangairan,mumaosen,houyingchun*　　laboftumorcellularandmolecularbiology,collegeoflifesciences,shaanxinormaluniversity,xi’an710062,china　　[abstract]aim:toinvest

3、igatetheeffectofsirnatargetingfakgeneonproliferationandmotilityofcolorectalcancer.methods:rebinantplasmidsthatproducedsirnastargetingfakinedbyrtpcrandimmunocytochemistry.theeffectsoffakgeneknockdoorphologicalchanges,proliferation,andmotilityidstargetingfakrnaandproteinlevelrnalevelaximalat48hposttr

4、ansfectionedependent.theabilityofproliferationandmotilityofcaco2cellsidmediatedfaksirnacouldinhibitfakgeneexpression.theproliferation,motilityandapoptosisotilityandapoptosis,etc.theresultsmaybeusedasthereferenceforgenetherapyofcolorectalcancer.　　[keyallinterferingrna;colorectalcancer;fak;cellproli

5、feration;cellmotility近年来以黏附相关因子为靶点的治疗成为基因治疗研究的新策略[1],黏着斑激酶(focaladhesionkinase,fak)是近年来发现的细胞黏附介导的信号通路的重要因子,作为胞内信号蛋白酪氨酸激酶,于1992年被独立鉴定为src癌基因的底物。.fak的相对分子质量(mr)为125000,定位于人染色体8q24,与cmyc基因座接近,此基因座在人癌细胞中往往被激活而强化[2]。fak作为信号转导的关键分子,可传递由胞外到胞内的多种信号,其在结肠癌中表达升高而在正常组织细胞中表达呈弱阳性的特点开始引起研究人员的关注[3]。有研究显示,fak基因在结直肠

6、癌组织中表达升高[4],并与癌细胞增殖、侵袭转移密切相关,但作用机制还不明确。本实验将靶向fak基因的sirna表达载体导入caco2细胞,探索faksirna对结直肠癌细胞增殖和迁移的影响并初步探讨其作用机制,为结直肠癌基因治疗积累实验资料。　　1材料和方法　　1.1材料人结直肠癌细胞株caco2购于美国atcc。重组质粒pu6h1gfp/faksirna为本实验室设计、百奥生物技术有限公司(南通)构建,大小为5.5kb,经测序正确。限制性内切酶hindⅲ购自neb公司。脂质体lipofectamine2000、trizol试剂均为美国invitrogen公司产品。rpmi1640培养

7、基购自美国gibco公司。胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司。四甲基偶氮唑蓝(mtt)购自美国amresco公司。rt007amv反转录酶购自杭州博日科技有限公司。fak、gapdh引物由北京奥科生物技术有限责任公司合成。针对fak的单克隆抗体(mab)购自santacruz公司。sp免疫组化试剂盒购自北京博奥森生物技术有限公司。hoechst33258购自南京凯基基因有限公司。其他试剂均