microrna-30b对人结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

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1、南方医科大学2010级硕士学位论文MicroRNA．30b对人结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究TheeffectofmicroRNA·-30bonproliferationandapoptosisofcolorectalcancerceHsandthemechanisminvolved课题来源：广东省科技计划项目(20088030301163；20108031600119)学位申请人导师姓名专业名称培养类型培养层次所在学院张念杰张刚庆主任医师外科学专业学位硕士第三临床医学院2013年4月20日广州硕士学位

2、论文MicroRNA．30b对人结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究硕士研究生：张念杰指导教师：张刚庆主任医师目的和意义摘要结直肠癌(colorectalcarcinoma,CI配)是我国第三位最常见的恶性肿瘤，并且近年来其发病率呈逐年上升趋势。在结直肠癌发病早期，90％的病人可通过手术治疗治愈，然而，大部分病人在确诊时已是疾病晚期，预后差。因此，加强结直肠癌机制的研究，寻找预防和治疗的有效途径，是结直肠癌研究的重要内容。MicroRNA(miRNA)是一种大小约17~25个核苷酸(nucleotide，nt

3、)的非编码单链小分子RNA，广泛存在于真核生物中，是一组不编码蛋白的短序列烈A。miRN如臣过与靶基因mRNA的3’UTR非编码区(3’untranslatedregion,3'UTR)互补匹配导致该mRNA的降解而发挥调节作用。在哺乳动物中发现大约1000种miRNAs，miRNA具体的生理病理功能，目前仍在探索之中。相关文献显示：1．miRNA可扮演着癌基因或抑癌基因的角色；2．miRN砧臣过调控细胞迁移、侵袭、细胞增殖、上皮间质转化(EMT)、血管生成及细胞凋亡参与肿瘤的转移等进程；3．miRNA可作为生物

4、学标记物。miRNA参与生物体发育、细胞增殖、分化和凋亡等多种生物过程，并且miRNA表达失调可能参与肿瘤的病理过程。近年来，越来越多的证据表明，在结肠癌的发展过程中伴随着miRNA的表达失调。有些中文摘要miRNA通过调控癌基因或抑癌基因在结肠癌中起作用，有些癌基因或抑癌基因通过调控miRNA发挥作用。MiRbase数据库显示，hsa-mir-30b(miR-30b)全长21m，在多种组织中泛表达，其表达无组织特异性。研究显示，miR-30b在多种实体瘤的发生发展中表达失调。Wszolek等用微阵列芯片及实时荧

5、光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)比较侵袭性膀胱癌与非侵袭性膀胱癌中miRNA表达的变化，发现miR-30b，miR-31，miR-141，miR-200a,miR-200b，miR-200c，miR-205，miR．21在侵袭性膀胱癌组织中表达明显下降，miR-99a在非侵袭性膀胱癌组织中表达明显升高，体外侵袭实验进一步证实miR-30b，miR-3l，miR-141与膀胱癌细胞的侵袭性具有明显相关性。miR-30b可通过靶基因影响肿瘤的侵袭性。在黑色素瘤中，Gaziel．Sovran等通过微阵列芯片发现，m

6、iR-30b／30d在黑色素瘤中表达升高，并且其高表达水平与肿瘤分期、转移潜能相关、miR-30b／30d高表达组较低表达组复发率高，总体生存期短。外源性过表达miR-30b／30d可促进黑色素瘤细胞的侵袭及免疫抑制，其机制是miR-30b／30d靶向抑制转移酶GALNT7，引起免疫抑制因子IL．10合成增多，降低免疫细胞的激活及募集，促进细胞侵袭。由此可见，miR-30b在多种肿瘤中发挥了重要作用。经Pubmed等数据库检索，未检索到IY腆30b在结肠癌中相关研究报、j山迫。基于miR-30b的研究现状，本研究

7、首先通过实时定量R1『-PCR鉴定结肠癌组织中miR-30b的表达特点，初步探讨miR-30b在结肠癌中的表达情况。外源性改变miR-30b的表达水平观察其对结肠癌细胞增殖与凋亡的影响，结合生物信息学预测及双荧光素酶报告系统验证其靶基因，阐明miR-30b在结肠癌发生发展中所扮演的角色，为深入理解结肠癌发病的分子机制和寻找新的分子靶向治疗靶点提供实验基础。材料和方法1．临床标本收集Ⅱ硕士学位论文收集南方医科大学附属南方医院2005年1月至2010年12月结直肠癌及对应癌旁组织43例，采集前均通过南方医科大学附属南

8、方医院医学伦理委员会批准及患者知情同意。所有标本均经病理诊断确诊为结肠癌。所有患者术前尚未接收放化疗治疗。2．细胞培养人结直肠癌细胞HCTIl6、SW480采用含10％胎牛血清的RPMll640培养基，293FT细胞采用5％DMEM培养基，在37"C、5％C02、饱和湿度的条件下传代培养，细胞状态良好时用于实验。3．载体构建(1)慢病毒载体pLVTHM／miR-30b：人