电离辐射联合顺铂对人肺癌细胞中BTG3基因表达的影响.pdf

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1、第32卷第2期辐射研究与辐射工艺学报Vb1．32．NO．22014年4月J．Radiat．Res．Radiat．Process．April2014电离辐射联合顺铂对人肺癌细胞中BTG3基因表达的影响王利利涂或贺汝燕秦颂兵徐晓婷周菊英(苏州大学附属第一医院放疗科苏州215006)(苏州大学医学部放射医学与防护学院江苏省放射医学与防护重点实验室苏州215123)摘要加速器产生的6-MVX一射线一次性照射体外培养的人肺腺癌细胞株A549和SPCA一1，细胞的吸收剂量分别设置为0、1、3、5和8Gy，细胞照射后24h及单次接受5Gy照射后6

2、、12和24h后取样；X一射线联合顺铂对BTG3表达的影响研究设立单纯照射组(5Gy)、顺铂处理组(20pmol·L顺铂)和联合处理组(5Gy+20gmoltL顺铂)，上述实验均以未给予任何处理的细胞为对照组；采用Westernblot及RT-PCR法检测受到不同剂量电离辐射及照射后不同时间肿瘤细胞中BTG3表达水平。Westernblot与PCR检测结果均显示，A549和SPCA．1细胞在受到不同剂量的x．射线照射后24h，其BTG3蛋白及mRNA表达量均明显增加，并随电离辐射剂量的增加而增加，与对照组比较有统计学差异(户5．25

3、—15．75，p<0．05)；照射后不同时间检测结果显示，细胞在x．射线照射4h后BTG3蛋白及mRNA的表达量即开始上升，并持续到照射后24h，与照射前相比有统计学差异(户7．52—11．18，p<0．05)；联合处理组BTG3的表达量均明显高于单纯照射组、顺铂处理组和对照组(t=-7．02—15．86．p<0．05)。电离辐射联合顺铂可以上调肺癌细胞株中BTG3的表达，BTG3基因有可能作为肺癌放化疗的靶基因。关键词BTG3，肺癌细胞系，电离辐射，顺铂中图分类号R811．5肺癌是世界上发病率最高的恶性肿瘤之一，死的发生、发展、预

4、防和治疗等方面具有重要意义。亡率居于所有恶性肿瘤之首位IlJ。随着其分子生物本研究初步探讨电离辐射联合顺铂对人肺腺癌学机制研究的深入和生物靶向治疗的临床应用，与细胞株A549和SPCA一1中BTG3的影响，以期为肺癌相关的基因在制定其临床研究和治疗方案中显临床寻找肺癌新的放化疗靶基因提供实验参考依得越来越重要]。BTG3位于人染色体21q11．2一据。q21．1，编码含252个氨基酸的蛋白质分子J。BTG31材料与方法负向调节细胞周期，参与了细胞分化、组织器官的形成，在多种肿瘤中呈低表达或沉默状态。在肺癌1．1药物和试剂的大部分临床

5、病例中亦可见到BTG3表达降低，缺RPMI1640培养基干粉、小牛血清、胎牛血清、乏BTG3的小鼠呈现肺肿瘤的高发生率l4J。另外，0．25％胰酶购自美国Gibco公司，蛋白酶抑制剂购BTG3在肾细胞癌、人原代口腔鳞癌细胞OSCCs中自瑞士罗氏公司，所需抗体均购自美国SantaCraze表观遗传学上呈被沉默状态；与正常的前列腺上皮公司，BTG3PCR引物采用Primer5软件设计，交细胞RWPE一1相比，BTG3在前列腺癌细胞系由美国Invitrogen公司合成，PCR反应试剂盒购自LNCaP和PC3中的表达明显下调曲J。此外，在正

6、美国Promega公司。实验用细胞株人肺癌A549和常细胞中BTG3的缺失能诱导细胞的衰老，这些研SPCA一1细胞株购自中国科学院上海细胞所，由苏究提示BTG3与人类肿瘤的发生发展有着重要的关州大学肿瘤放射生物学实验室培养和保藏。联[7]。因此，BTG3基因相关功能的研究，对肿瘤基金资助：江苏省放射医学与防护重点实验室开放课题(KJS1239)资助第一作者：王利利，女，1975年11月出生，2011年11月于苏州大学获博士学位，现为苏州大学附属第一医院放疗科医师，E-mail：lyy~jll@163．tom通讯作者：周菊英，医学博士

7、，主任医师，博士生导师，E—mail：zhjuying@sohu．corn收稿日期：收稿2013．11-27；修回2014—02．07辐射研究与辐射工艺学报2014，32：020202(6)1．2细胞培养1．6RT-PCR法实验将人肺癌细胞株A549和SPCA．1培养在收集细胞，Trizol提取细胞总RNA，紫外分光含10％H~牛血清的RPMI1640培养基中，在37℃、光度计测定RNA纯度。各样品取5gg总RNA采用体积分数为5％的CO2且饱和湿度的培养箱内培养，反转录试剂盒合成第一链cDNA。BTG3上游引物取指数生长期细胞进行

8、实验研究。为5’AATTGCTGCCGTTGTCTTCTTT3’，下游引物为：5’GATCTCATCCTTGTTCTCATCTTTA3’，扩1．3细胞照射增产物为370bp。GADPH上游引物为：5’使用德国西门子PRIMUS医用电子