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《盐酸槐定碱注射液对dna拓扑异构酶活性抑制作用的研究论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、盐酸槐定碱注射液对DNA拓扑异构酶活性抑制作用的研究论文纪远中，刘桂敏，胡人杰，李德华【关键词】盐酸槐定碱,；,,,拓扑异构酶；,,活性作用摘要：目的研究盐酸槐定碱对DNA拓扑异构酶I和酶II（TOPOI、II）活性的影响。方法DNA超螺旋解旋法检测盐酸槐定碱注射液对拓扑异构酶I及酶II介导的PBR322DNA解旋反应的影响。结果盐酸槐定碱注射液能明显抑制TOPOI介导的DNA解旋及断裂，在终浓度为6250μg/ml和3215μg/ml时对拓扑异构酶I均有抑制作用，且剂量--效应关系密切，但对拓扑异构酶II介导的DNA解旋反应无影响。结论结果提示盐酸槐定碱注射液的直接作用靶点是
2、DNA拓扑异构酶I，该药为拓扑异构酶I抑制剂。关键词：盐酸槐定碱；拓扑异构酶；活性作用Abstract：ObjectiveThepurposeofthisstudyotingDNAtopoisomerase.MethodsTheeffectofSophoridinehydrochloriumontopoisomeraseeasuredbysupercoiledDNArelaxationassay.ResultsSophoridinehydrochloriumcouldmarkedlyinhibittheactivityoftopoisomeraseI,by6250μg/mlan
3、d3215μg/mlrespectively,couldnotprovethatitinhibitedtheactivityoftopoisomeraseII.ConclusionItmaybethefactthatDNAtopoisomeraseIisadirecttargetinantitumoractivityofSophoridinehydrochlorium.Key;DNAtopoisomerase;antitumoractivity癌症是严重威胁人类健康的一类疾病.freela公司产品。DNA拓扑异构酶I试剂盒购自大连保生工程有限公司，DNA拓扑异构酶II系美国US
4、B产品，琼脂糖系GIBCO产品，羟基喜树碱购自黄石飞云制药有限公司，鬼臼乙义苷（VP-16）购自江苏恒瑞医药股份有限公司。1.2方法1.2.1拓扑异构酶I活性的测定在20μl的反应体系中含有10×反应缓冲液（350mmol/LTris-HClpH8.0mmol/L,720mmol/L氯化钾，5mmol/L氯化镁，50mmol/LDTT,50mmol/LSpermidine）2μl,0.1%BAS2μl，PBR3220.36μg,阳性对照管（羟基喜树碱）终浓度为212.5μg/ml，10.6μg/ml。各试管分别加入不同浓度的槐定碱（终浓度分别为6250，3215，625μg/m
5、l）。拓扑异构酶I，各管用蒸馏水补充至20μl，混匀后置37℃反应30min，加入5μl终止液（5%的SDD,.freelg/ml溴酚兰）终止反应。在TBE电泳缓冲液中进行琼脂糖电泳，40V电压下，电泳4h。溴化乙啶溶液（1μg/μl）染色30min,置260nm紫外线下观察DNA的电泳区带，并摄片记录。1.2.2拓扑异构酶II活性的测定参照TOPOII试剂盒实验方法,20μl的反应体系中含有10x反应缓冲液（100mmol/LTris-HCl,pH7.9mmol/L,500mmol/L氯化钠，500mmol/L氯化钾，50mmol/L氯化镁,1mmol/LEDTA,0.15m
6、g/mlBSA,10mmol/LATP）2μl,PBR322DNA0.3μg,阳性对照管（鬼臼乙义苷VP-16）5000，1000，500μg/ml。各试管分别加入不同浓度的槐定碱:6250，3215，625μg/ml。储备酶用酶稀释液（10mmol/L磷酸钠pH7.1,50mmol/L氯化钠，0.2mmol/LDTT,0.1mmol/LEDTA,0.5mg/mlBSA,10%的甘油）稀释至1μg/ml,加入1μl。各管用蒸馏水补充至20μl，在30℃反应15min，加入3μl终止液（7mmol/LEDTA,0.77%SDS,20%甘油，0.25mg/ml溴酚兰）终止反应。电泳
7、、染色及观察过程同1.2.1。2结果2.1盐酸槐定碱注射液对TOPOI活性的影响结果见图1。由图1可见阳性对照药羟基喜树碱在212.5和10.6μg/ml时对TOPO酶I均有显著的抑制作用（C,D道）。盐酸槐定碱具有一定的抑制TOPO酶I的的作用，6250μg/ml剂量组对TOPO酶I有较好的抑制作用,抑制该酶介导的DNA断裂反应，3215μg/ml剂量组作用稍差，剂量降至625μg/ml抑制作用不明显，剂量效应关系密切（E,F,G道）。2.2盐酸槐定碱注射液对TOPOII活性的影响由图2可
