盐酸槐定碱注射液对DNA拓扑异构酶活性抑制作用的研究

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1、盐酸槐定碱注射液对DNA拓扑异构酶活性抑制作用的研究作者：纪远中，刘桂敏，胡人杰，李德华【关键词】盐酸槐定碱,；,,,拓扑异构酶；,,活性作用摘要：目的研究盐酸槐定碱对DNA拓扑异构酶I和酶II活性的影响。方法DNA超螺旋解旋法检测盐酸槐定碱注射液对拓扑异构酶I及酶II介导的PBR32DNA解旋反应的影响。结果盐酸槐定碱注射液能明显抑制TOPOI介导的DNA解旋及断裂，在终浓度为650μg/ml和21μg/ml时对拓扑异构酶I均有抑制作用，且剂量--效应关系密切，但对拓扑异构酶II介导的DNA解旋反应无影响。结论结果

2、提示盐酸槐定碱注射液的直接作用靶点是DNA拓扑异构酶I，该药为拓扑异构酶I抑制剂。关键词：盐酸槐定碱；拓扑异构酶；活性作用Abstract：ObjectiveThepurposeofthisstudywastoinvestigatetheprincipleofactivityofpromotingDNAtopoisomerase.MethodsTheeffectofSophoridinehydrochloriumontopoisomerasewasmeasuredbysupercoiledDNArelaxationa

3、ssay.ResultsSophoridinehydrochloriumcouldmarkedlyinhibittheactivityoftopoisomeraseI,by250μg/mland215μg/mlrespectively,couldnotprovethatitinhibitedtheactivityoftopoisomerasemaybethefactthatDNAtopoisomeraseIisadirecttargetinantitumoractivityofSophoridinehydrochlo

4、rium.Keywords：Sophoridinehydrochlorium;DNAtopoisomerase;antitumoractivity癌症是严重威胁人类健康的一类疾病，寻找有效的抗癌药物是目前世界医学界重要的研究课题，由于合成药物在伴随治疗中出现明显的副作用，天然药物越来越受到人们的重视和青睐。盐酸槐定碱是一种植物来源的天然药物，在槐树的果实中含量很高。盐酸槐定碱注射液主治癌症，疗效确切，毒副作用极低。为进一步探讨该药物的作用机理，我们以DNA拓扑异构酶I、II为靶点，体外测定盐酸槐定碱注射液对其活性的影

5、响，以便为临床治疗肿瘤提供更多的依据。结果报道如下。　　1材料和方法材料药物盐酸槐定碱注射液由江西中医学院提供。试剂PBR322DNA、溴化乙锭及二甲苯青均系Sigma公司产品。DNA拓扑异构酶I试剂盒购自大连保生工程有限公司，DNA拓扑异构酶II系美国USB产品，琼脂糖系GIBCO产品，羟基喜树碱购自黄石飞云制药有限公司，鬼臼乙义苷购自江苏恒瑞医药股份有限公司。方法拓扑异构酶I活性的测定在20μl的反应体系中含有10×反应缓冲液μl,%BASμl，μg,阳性对照管终浓度为212.μg/ml，μg/ml。各试管分别加

6、入不同浓度的槐定碱。拓扑异构酶I，各管用蒸馏水补充至20μl，混匀后置37℃反应30min，加入μl终止液终止反应。在TBE电泳缓冲液中进行琼脂糖电泳，40V电压下，电泳h。溴化乙啶溶液染色30min,置260nm紫外线下观察DNA的电泳区带，并摄片记录。拓扑异构酶II活性的测定参照TOPOII试剂盒实验方法,20μl的反应体系中含有10x反应缓冲液μl,PBR322DNA0.μg,阳性对照管000，1000，500μg/ml。各试管分别加入不同浓度的槐定碱:650，215，62μg/ml。储备酶用酶稀释液稀释至1μ

7、g/ml,加入1μl。各管用蒸馏水补充至20μl，在30℃反应1min，加入μl终止液终止反应。电泳、染色及观察过程同。　2结果.1盐酸槐定碱注射液对TOPOI活性的影响结果见图1。由图1可见阳性对照药羟基喜树碱在和10.μg/ml时对TOPO酶I均有显著的抑制作用。盐酸槐定碱具有一定的抑制TOPO酶I的的作用，650μg/ml剂量组对TOPO酶I有较好的抑制作用,抑制该酶介导的DNA断裂反应，1μg/ml剂量组作用稍差，剂量降至62μg/ml抑制作用不明显，剂量效应关系密切。.2盐酸槐定碱注射液对TOPOII活性的

8、影响由图2可见,随着盐酸槐定碱浓度的增加，超螺旋DNA均无明显变化，说明盐酸槐定碱注射液对TOPOII的活性没有影响。阳性对照药VP-16在000，1000及500μg/ml三个浓度均能显著抑制TOPOII酶的活性，量效关系明显。3讨论DAN拓扑异构酶是近年发现的维持DNA复制、重组、转录等信息传递及加工的重要空间构型酶，其催化单链或双链DNA