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时间:2018-11-22
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1、细胞凋亡和Caspase作者:谢庆祥,林吓聪,韩聪祥 SignificanceofapoptosisandCaspase3expressioninchronicobstructivekidneys ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatetherolesandmechanismsofapoptosisanditseffectormoleculeCaspase3inthepathogenesisofchronicobstructivekidney.MethodsCaspa
2、se3expressionsin43obstructiverenaltissuesand10normalrenaltissuesinedbyimmunohistochemistry,andapoptosisinedbyTUNELmethods.Therelationshipsbetalkidneys(P<0.05).Caspase3expressionsinobstructivekidneysportantroleinrenalcellapoptosisassociatedm29例,3-7
3、mm14例。肾盂尿检查30例:pH值7.0-8.1,尿比重均≤1.01。取患肾明显薄软处组织和10例正常肾组织进行石蜡包埋,切片。常规HE染色,病理组织学检查。 1.2方法①免疫组化:采用SABC方法(微波炉热修复)。Caspase3(1∶40)为兔抗人多克隆抗体,SABC试剂盒为武汉博士德生物公司提供。DAB显色,苏木素复染。PBS替代一抗作为阴性对照。② 细胞凋亡和Caspase作者:谢庆祥,林吓聪,韩聪祥 SignificanceofapoptosisandCaspase3expre
4、ssioninchronicobstructivekidneys ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatetherolesandmechanismsofapoptosisanditseffectormoleculeCaspase3inthepathogenesisofchronicobstructivekidney.MethodsCaspase3expressionsin43obstructiverenaltissuesand10normalrenaltissuesine
5、dbyimmunohistochemistry,andapoptosisinedbyTUNELmethods.Therelationshipsbetalkidneys(P<0.05).Caspase3expressionsinobstructivekidneysportantroleinrenalcellapoptosisassociatedm29例,3-7mm14例。肾盂尿检查30例:pH值7.0-8.1,尿比重均≤1.01。取患肾明显薄软处组织和10例正常肾组织进行石蜡包埋,切片。常规
6、HE染色,病理组织学检查。 1.2方法①免疫组化:采用SABC方法(微波炉热修复)。Caspase3(1∶40)为兔抗人多克隆抗体,SABC试剂盒为武汉博士德生物公司提供。DAB显色,苏木素复染。PBS替代一抗作为阴性对照。②细胞凋亡检测:采用原位细胞凋亡TUNEL检测法,按说明书进行操作(德国宝灵曼公司提供)。③肾组织中胶原纤维染色:采用VanGieson苦味酸酸性复红染色法行胶原纤维染色,显微镜下观察,胶原纤维呈红色,肌纤维等组织呈黄色。 1.3结果判断Caspase3阳性染色主要分布于
7、细胞浆中,少数也见于细胞核,呈棕黄色或棕褐色。按阳性细胞数分为三个等级,阳性细胞数0为阴性(-)、≤25%为弱阳性(+)、>25%为强阳性()。凋亡指数:至少计数500个细胞中凋亡阳性细胞百分比。根据胶原纤维含量判断肾纤维化程度:0级(正常)为肾小球囊周和肾小管基底膜无胶原纤维染色,一级为肾小球和肾小管,周围可见胶原纤维染色,二级为肾小球和肾小管,周围胶原纤维染色明显增强、肾小管基底膜增厚,三级为肾间质,可见明显的胶原纤维染色。 1.4统计方法应用SPSS10.0统计软件包,采用χ2检验、方差
8、分析和两样本比较t检验。 2结果 由表1可见,Caspase3在肾小管和肾间质中均可见阳性表达,梗阻肾组织的肾小管和间质中Caspase3表达均分别高于正常肾组织(P<0.05)。肾小管中Caspase3表达与肾纤维化之间相关无显著性(P>0.05),但间质中Caspase3表达随肾纤维化程度加重而增高(P<0.05)。肾皮质厚度≤3mm的肾小管Caspase3表达显著高于皮质厚度3-7mm者(P<0.05);但两者间质中Caspase3表达无统计学差异(P>0
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