hplc法测定磺啶冰黄片中胆红素的含量论文

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1、HPLC法测定磺啶冰黄片中胆红素的含量论文【摘要】目的建立高效液相色谱法测定磺碇冰黄片中胆红素含量的方法。方法采用HPLC法进行测定，色谱柱为DikmaC18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相:为氯仿-甲醇-2%二乙胺水溶液（80∶19∶1），检测波长：450nm，流速：1mL/min，柱温：45℃。结果胆红素在一定色谱条件下能完全分离，在0.62～1.85?滋g/ml浓度范围内线形关系良好，线性回归方程Y=5165741X-61229.freelg,批号10077-0201）；甲醇,氯仿和二乙胺均为色谱纯；水（超纯水），科室自制

2、。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：DikmaC18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：氯仿-甲醇-2%二乙胺水溶液（80∶19∶1）2；检测波长：450nm；流速：1.0mL/min；柱温：45℃。2.2溶液的制备2.2.1对照品溶液的制备精密称取胆红素对照品约10.30mg置100mL棕色量瓶中，加氯仿80mL，超声处理10min，迅速放冷至室温，并用氯仿稀释至刻度摇匀，精密量取5mL置50mL棕色量瓶中，用氯仿稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为对照液。2.2.2供试品溶液的制备取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（1

3、片量）置50mL棕色量瓶中,加氯仿约50mL超声处理10min，速放冷至室温，并用氯仿稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液20mL置50mL棕色量瓶中，用氯仿稀释至刻度，摇匀，用0.45μm滤过，作为供试品溶液。2.2.3阴性对照液取除人工牛黄以外的其他三味药品按处方制备成缺人工牛黄样品，再按“2.2.2”项下制备，即得。2.3系统适用性试验分别取对照品溶液、样品溶液、阴性对照液注入色谱仪，记录色谱图，从图1中可以看出，阴性对照色谱图在对应的胆红素位置处无干扰峰，即表明其它组分对测定无干扰。胆红素与其它组分峰的分离度都大于1.5。理论板

4、数以胆红素峰计，不低于1500。2.4标准曲线的制备精密量取对照贮备液0.60、0.90、1.20、1.50、1.80mL于10mL棕色量瓶中，加氯仿稀释至刻度，摇匀。分别进样10μL，记录色谱图，由峰面积（Y）(n=3)对相应的浓度（X）直线回归，胆红素回归方程为：Y=5165741X-61229，γ=0.9999线性范围为0.62～1.85μg/mL。2.5精密度考察取同一对照品溶液进样6次，10μL，测定峰面积，计算RSD值为0.88%，结果表明仪器具有良好的精密度。2.6重复性试验取同一批号的样品6份，按“2.2.2”项下方法制备

5、供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液10μL注入高效液相色谱仪器。测定峰面积,根据线性回归方程计算含量。结果其相对标准偏差RSD分别为0.95%（n=6）。2.7稳定性试验取同一样品溶液，在0、2、4、6、8、10h分别进样10μL，依法测定，6次测定的胆红素峰面积RSD分别为1.1％，表明样品溶液在10h内相对稳定。2.8回收率试验3精密量取同一批(批号：20030402)已知含量的供试品0.25g平行6份置蒸发皿中（平均片重0.4915g），分成3组，每组两份，分别加入对照品溶液0.8、1.0、1.2mL（60.0μg/mL胆红素氯仿溶

6、液），将溶液蒸干，按“2.2.2”项下制备，摇匀，按“2.1”项下分别进样10μL，记录色谱图，计算胆红素的回收率。结果见表1。2.9样品含量测定将3批不同批号的磺碇冰黄片按“2.2.2”项下方法制备，进样10μL，测定峰面积,按外标法计算含量。结果见表2。3结论3.1检测波长的选择人工牛黄是磺碇冰黄片有效成分，具有解热、抗炎及抗感染作用，其中有效成分是胆红素、胆酸、去氧胆酸等。牛黄之贵贵在胆红素，因此选择其中的胆红素作为指标进行含量测定。胆红素易氧化，溶液颜色变绿，所以有关操作应尽量在避光条件下快速进行4。测定胆红素的紫外-可见光谱在4

7、50nm有最大吸收波长，故选450nm作HPLC法的检测波长。3.2流动相的选择本实验比较了氯仿-乙腈-1%三乙胺溶液、氯仿-甲醇-1%三乙胺溶液、氯仿-甲醇-2%二乙胺水溶液等多种流动相系统，结果以氯仿-甲醇-2%二乙胺水溶液流动相峰形最好，分离最完全。3.3溶剂的选择实验中曾比较过使用甲醇、乙腈、氯仿做溶剂，用甲醇和乙腈做溶剂时出现前沿峰对测定有干扰，使用氯仿柱效高，胆红素与其他组分色谱峰能很好分离。【