hplc法测定冰黄软膏中盐酸小檗碱含量

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1、HPLC法测定冰黄软膏中盐酸小檗碱含量【摘要】目的采用HPLC法测定冰黄软膏中盐酸小檗碱的含量，以更好地控制该制剂的质量。方法采用DiamonsilC18(250mm×4.6mm，5μm)柱分离黄连中盐酸小檗碱，以磷酸盐缓冲液［0.05mol/L磷酸二氢钾和0.05mol/L庚烷磺酸钠(1∶1)，含0.2%三乙胺，并用磷酸调节pH值至3.0］-乙腈(67：33)，流速为：1ml/min，检测波长为265nm。结果线性范围为0.0624~0.312μg。盐酸小檗碱的平均回收率为98.7%，RSD为1.48%。结论试验

2、方法操作简单，提取液的转移次数少，测定结果准确，可靠，重现性好。【关键词】冰黄软膏；盐酸小檗碱；HPLC5冰黄软膏收载于地标升国标，标准号为：WS-10182(ZD-0182)-2002，由大黄、黄连、硫磺等药味组成。清热除湿，解毒化瘀。用于肺热血瘀所致寻常型痤疮，症见：皮疹红肿，或有脓疱结节，用手挤压有小米粒样白色脂栓排出，伴有颜面潮红，皮肤油腻，大便秘结，舌质红，苔薄黄，脉弦数。黄连为处方中主要药味，黄连苦寒，清热除湿作用较强。原标准中无盐酸小檗碱的含量测定项。目前，黄连中主要有效成分为盐酸小檗碱。中药软膏剂基

3、质成分复杂，易干扰有效成分的提取，故在供试品制备过程中多需进行冷冻等脱基质处理，本文采用硅藻土与样品直接混合研磨，用甲醇索氏提取，提取液直接定容，减少提取液的转移次数，减少试验误差。对黄连中所含的有效成分盐酸小檗碱的含量进行测定。供试品色谱峰分离效果好，阴性对照无干扰，测定结果准确、重复性好，可用于有效控制制剂的质量。1仪器与试药1.1仪器岛津LC-20A高效液相色谱仪。1.2试药盐酸小檗碱对照品(批号110713-200208，供含量测定用，中国药品生物制品检定所)；乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯。2方法与结果2

4、.1色谱条件色谱柱：DiamonsilC18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：磷酸盐缓冲液［0.05mol/L磷酸二氢钾和0.05mol/L庚烷磺酸钠(1∶1)，含0.2%三乙胺，并用磷酸调节pH值至3.0］-乙腈(67∶33)；流速：1ml/min；检测波长：265nm［1］。柱温：35℃。理论板数按盐酸小檗碱峰计算，应不低于4000。2.2对照品溶液的制备精密称取盐酸小檗碱对照品9.75mg，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取2ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀(每

5、1ml含盐酸小檗碱15.6μg的溶液)，即得。2.3供试品溶液的制备取本品内容物约1g，精密称定，加硅藻土35g，研匀，定量转移至索氏提取器中，加甲醇适量，加热回流提取至无色，回收甲醇，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。2.4干扰试验按样品制备方法，制备不含黄连的阴性样品，照“2.3”项下操作，制得阴性样品溶液。进样10μl，按以上色谱条件测定，结果阴性样品色谱图中，在与盐酸小檗碱对照品溶液及供试品中盐酸小檗碱相应保留时间处，无干扰峰出现。2.5线性关系的考察精密吸取2.2项下

6、对照品溶液4、8、12、16、20μl，分别注入高效液相色谱仪，测其峰面积积分值，计算回归方程。回归方程：Y=142773X-23145，r=0.9999。结果表明盐酸小檗碱进样量在0.0624~0.312μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。2.6精密度试验取浓度为15.6μg/ml的对照品溶液10μl，按以上色谱条件连续进样5次，测定峰面积，结果RSD为0.37%。试验结果显示仪器精密度良好。2.7稳定性试验取供试品溶液在12h内，按以上色谱条件进样5次，(0、2、4、8、12h)，测定峰面积，结果RSD为1.0

7、2%。试验结果显示供试品溶液12h内稳定性良好。2.8重复性试验按“2.3”项下的方法，按以上色谱条件测定，对060298的样品进行测定，共测定5份，测定含量RSD为0.52%，试验结果表明该方法重复性良好。2.9回收率试验取样品约0.55g(批号：060298，含量0.24mg/g)，精密称定，共测定5份，加硅藻土3g，精密加入甲醇(含盐酸小檗碱对照品0.022mg/ml)5ml，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按以上色谱条件测定峰面积，计算加样回收率，结果表1。试验结果表明该方法回收率良好。2.10样品测定

8、照“2.3”项下方法，按以上色谱条件对三批样品进行测定，结果见表2。3讨论3.1软膏剂中由于含有凡士林、液体石蜡等基质，这些基质在提取时会干扰有效成分的提取，有标准采用置冰箱中冷藏的方式进行脱腊处理。本文选用软膏与硅藻土混合均匀，用甲醇索氏提取，硅藻土可吸附软膏中的基质并充分分散软膏，使提取充分，甲醇提取液经浓缩后可直接定容。方法操作简单，重复性好，可最大限