hplc法测定磺啶冰黄片中胆红素的含量

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1、HPLC法测定磺啶冰黄片中胆红素的含量【摘要】目的建立高效液相色谱法测定磺碇冰黄片中胆红素含量的方法。方法采用HPLC法进行测定，色谱柱为DikmaC18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相:为氯仿-甲醇-2%二乙胺水溶液（80∶19∶1），检测波长：450nm，流速：1mL/min，柱温：45℃。结果胆红素在一定色谱条件下能完全分离，在0.62～1.85?滋g/ml浓度范围内线形关系良好，线性回归方程Y=5165741X-61229，γ=0.9999，加样回收率为99.2%；RSD为1.1%（n=9）。结论本方法测定磺碇冰黄片中胆红素的含量,准确可靠,方法简便。

2、【关键词】磺碇冰黄片；胆红素；HPLC法；含量测定磺啶冰黄片为近来临床上常用的一类复方抗菌药，现行方法对其所含的磺胺甲口恶唑，甲氧苄啶作了含量测定的规定[1]，而对其中的人工牛黄的含量控制未作要求。人工牛黄中主要成分为胆红素，故我们用外标法对其含量进行测定，为药品提供良好的质量控制依据。1实验材料1.1仪器LC-10ATVP高效液相仪(日本岛津)，SPD-10AVP紫外检测器(日本岛津)，色谱工作站（浙江大学N3000），AB135-S电子分析天平(瑞士梅特勒)，AEU-210电子分析天平(湘仪)，UV-2401紫外分光光度计（日本岛津)。1.2试药磺碇冰黄片;山西晋华

3、药业有限公司（批号200304022003050320030801）；胆红素对照品（中国药品生物制品检定所，规格:20mg,批号10077-0201）；甲醇,氯仿和二乙胺均为色谱纯；水（超纯水），科室自制。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：DikmaC18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：氯仿-甲醇-2%二乙胺水溶液（80∶19∶1）[2]；检测波长：450nm；流速：1.0mL/min；柱温：45℃。2.2溶液的制备2.2.1对照品溶液的制备精密称取胆红素对照品约10.30mg置100mL棕色量瓶中，加氯仿80mL，超声处理10min，迅速放冷至室温，并用氯

4、仿稀释至刻度摇匀，精密量取5mL置50mL棕色量瓶中，用氯仿稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为对照液。2.2.2供试品溶液的制备取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（1片量）置50mL棕色量瓶中,加氯仿约50mL超声处理10min，速放冷至室温，并用氯仿稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液20mL置50mL棕色量瓶中，用氯仿稀释至刻度，摇匀，用0.45μm滤过，作为供试品溶液。2.2.3阴性对照液取除人工牛黄以外的其他三味药品按处方制备成缺人工牛黄样品，再按“2.2.2”项下制备，即得。2.3系统适用性试验分别取对照品溶液、样品溶液、阴性对照液注入色谱仪，记录

5、色谱图，从图1中可以看出，阴性对照色谱图在对应的胆红素位置处无干扰峰，即表明其它组分对测定无干扰。胆红素与其它组分峰的分离度都大于1.5。理论板数以胆红素峰计，不低于1500。2.4标准曲线的制备精密量取对照贮备液0.60、0.90、1.20、1.50、1.80mL于10mL棕色量瓶中，加氯仿稀释至刻度，摇匀。分别进样10μL，记录色谱图，由峰面积（Y）(n=3)对相应的浓度（X）直线回归，胆红素回归方程为：Y=5165741X-61229，γ=0.9999线性范围为0.62～1.85μg/mL。2.5精密度考察取同一对照品溶液进样6次，10μL，测定峰面积，计算RSD

6、值为0.88%，结果表明仪器具有良好的精密度。2.6重复性试验取同一批号的样品6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液10μL注入高效液相色谱仪器。测定峰面积,根据线性回归方程计算含量。结果其相对标准偏差RSD分别为0.95%（n=6）。2.7稳定性试验取同一样品溶液，在0、2、4、6、8、10h分别进样10μL，依法测定，6次测定的胆红素峰面积RSD分别为1.1％，表明样品溶液在10h内相对稳定。2.8回收率试验[3]精密量取同一批(批号：20030402)已知含量的供试品0.25g平行6份置蒸发皿中（平均片重0.4915g），分成3组，每

7、组两份，分别加入对照品溶液0.8、1.0、1.2mL（60.0μg/mL胆红素氯仿溶液），将溶液蒸干，按“2.2.2”项下制备，摇匀，按“2.1”项下分别进样10μL，记录色谱图，计算胆红素的回收率。结果见表1。2.9样品含量测定将3批不同批号的磺碇冰黄片按“2.2.2”项下方法制备，进样10μL，测定峰面积,按外标法计算含量。结果见表2。3结论3.1检测波长的选择人工牛黄是磺碇冰黄片有效成分，具有解热、抗炎及抗感染作用，其中有效成分是胆红素、胆酸、去氧胆酸等。牛黄之贵贵在胆红素，因此选择其中的胆红素作为指标进行含量测定。胆红素易氧化，溶