高效液相色谱法同时测定金银花及叶中的黄酮类物质论文

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1、高效液相色谱法同时测定金银花及叶中的黄酮类物质论文【摘要】目的建立金银花和金银花叶提取物中黄酮类物质槲皮素及木犀草素的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱法，以甲醇0.02％磷酸(50∶50)为流动相，检测波长350nm。结果槲皮素、木犀草素分别在4.0～20，3.8～19μg/ml的浓度范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系,它们的加标回收率在95.07%～97.98%范围内,相对标准偏差0.32%～3.34%。结论此方法简便、灵敏、快速，可用于金银花药材中黄酮类物质的含量测定。【关键词】金银花；金银花叶；槲皮素；木犀草素；高效液相色谱SimultaneousDeterminationo

2、fFlavonoidpoundsinLonicerajaponicaanditsLeafbyHighPerformanceLiquidChromatographyAbstract：ObjectiveToestablishthemethodforthedeterminationofbothquercetinandlonicerininLonicerajaponicaanditsleafsimultaneously.MethodsTheponentsofquercetinandlonicerininLonicerajaponicaanditsleafinedbythehighperformanc

3、eliquidchromatographicatdetectionethanol0.02%phosphoricacidasmobilephase.ResultsThecalibrationcurvesofquercetinandlonicerinbetland3.8～19μg/mlrespecitively,andtherecoveriesoftple,sensitive,precisemethodcanbeusedtodeterminetheflavonoidpoundsinLoniceraJaponica.Keyanceliquidchromatography金银花为名贵中药材之一，具

4、有清热解毒，疏散风热等功效［1］，自古以来.freelm×4.6mm,5μm）Agilent公司；流动相为甲醇∶0.02%磷酸(50：50)；流速为1.0ml/min；检测波长350nm；柱温30℃；进样量10.0μl。2.2对照品和供试品溶液的制备对照品溶液的制备准确称取槲皮素对照品0.0300g，用甲醇溶解并定容于50ml容量瓶，配制成0.60mg/ml的溶液。取该溶液1.00ml,用甲醇稀释并定容至10ml,即得浓度为0.06mg/ml的槲皮素对照品溶液。记为溶液A。以相同的方法制备浓度为0.057mg/ml的木犀草素对照品溶液。记为溶液B。取1ml溶液A和1ml溶液B，混合均匀，得到

5、溶液C。供试品溶液的制备分别称取5g经过干燥粉碎的金银花和金银花叶各一份，用100ml甲醇在40℃超声提取30min,过滤，减压浓缩，浓缩液用石油醚除杂，然后用甲醇定容至25ml容量瓶，即得到金银花和金银花叶的供试品溶液。2.3色谱分离在2.1项色谱条件下，取溶液C进样，得到槲皮素和木犀草素的色谱图（图1），同样条件下，得到金银花和金银花叶供试品溶液的色谱图（图2～3）。2.4线性考察取槲皮素溶液A和木犀草素溶液B,分别将它们用甲醇稀释，得一系列不同质量浓度的对照品溶液后进样，以对照品溶液的浓度C（单位：μg/ml）为横坐标，峰面积积分值Y为纵坐标，得槲皮素和木犀草素对照品溶液的回归方程。结

6、果见表1。表1校准曲线方程（略）1.槲皮素2.木犀草素图1槲皮素和木犀草素对照品色谱图（略）图2金银花供试品溶液的HPLC图（略）图3金银花叶供试品溶液的HPLC图（略）2.5精密度实验在2.1项色谱条件下，取同一浓度对照品溶液，重复进样5次，测定峰面积，计算槲皮素和木犀草素的RSD分别为1.08%和0.38%。2.6重复性实验取同一批金银花和金银花叶粉末各3份，按上述方法制备供试品溶液并进行含量测定。计算花中槲皮素和木犀草素含量的RSD分别为2.73%和0.32%；叶中槲皮素和木犀草素含量的RSD分别为3.34%和0.33%。2.7稳定性实验取同一供试品溶液，分别于0，1，2，3，5，12

7、，24h进样，测定峰面积，计算花中槲皮素和木犀草素含量的RSD分别为2.21%和0.65%；叶中槲皮素和木犀草素含量的RSD分别为2.23%和0.48%。2.8回收率实验分别取已测知含量的金银花和金银花叶供试品溶液1.00ml各3份，以高中低3浓度水平加入适量的槲皮素和木犀草素对照品溶液，测定其含量，计算加样回收率和RSD。结果见表2～3。表2金银花供试品溶液的加标回收实验结果（略）表3金银花叶供试品溶液的加