高效液相色谱法同时测定杜仲叶药材中芦丁等3种黄酮类有效成分的含量论文

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1、高效液相色谱法同时测定杜仲叶药材中芦丁等3种黄酮类有效成分的含量论文伍庆王兴宁张明时曹桂红【摘要】目的建立同时测定杜仲叶中芦丁、槲皮素、山萘酚的高效液相色谱法。方法采用SpherisorbBDSC18柱（5μm，250mm×4.6mm），以甲醇-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱（甲醇：0min，30%；10min，30%；30min，50%；40min，60%；50min，30%）.freell·min-1，检测波长350nm。结果样品中芦丁、槲皮素、山萘酚的加样回收率分别为96%～98%，93%～97%，96%～101%；芦丁、槲皮素

2、、山萘酚的线性范围分别为0.579～5.79μg，r=0.9999；0.12～1.20μg，r=0.9998；0.109～1.09μg，r=0.9999。结论贵州不同产地杜仲叶药材中芦丁、槲皮素、山萘酚的含量差异很大。【关键词】高效液相色谱法杜仲叶芦丁槲皮素山萘酚杜仲EumiaulmoidesOliv属国家二级保护植物，是杜仲科杜仲属的落叶乔木，中国特有植物种，系地质史上第四纪冰川运动残留下来的占生孑遗树种［1，2］。具补肝肾、强筋骨、安胎之功效,主要用于治疗肾虚腰痛,筋骨无力,妊娠漏血,胎动不安,高血压病［3］，其皮是我国特有的

3、名贵滋补药材,近代研究发现杜仲叶与皮含有相同的化学成分，具有相同的药理作用，杜仲叶也是各种名贵保健品的重要原料。黄酮类化合物是杜仲药材的主要有效成分之一,具有多种生物活性，杜仲中黄酮类化合物含量的高低,也是判断杜仲药材及其相关产品的重要指标［4，5］。近年来，对杜仲黄酮类含量的测定多采用比色法和高效液相色谱法［6，7］，测定多为单一指标芦丁的定性定量分析，对于同时测定黄酮类物质（芦丁、槲皮素、山萘酚）3种有效成分还未见报道。为了充分合理的开发利用贵州省的杜仲资源，本文采用高效液相色谱法同时对杜仲叶中的黄酮类3种有效成分进行了定性定

4、量分析。1仪器与试药，250mm×4.6mm）色谱柱,Empol的容量品，并稀释至刻度，配置成含芦丁2.795mg·ml-1、槲皮素0.600mg·ml-1、山萘酚0.545mg·ml-1的对照品储备溶液。2.1.2对照品溶液分别精密吸取对照品储备溶液1ml，置于10ml的容量品中，用60%乙醇溶液溶解并稀释至刻度，配置成含芦丁0.2795mg·ml-1、槲皮素0.0600mg·ml-1，山萘酚0.0545mg·ml-1的对照品溶液。2.1.3供试品溶液精密称取杜仲叶粉末（过60目筛）2g，于100ml锥形品中，加入60ml60%

5、乙醇溶液，称定重量，冷浸8h、超声提取3h，冷却后用相应的醇浓度补足重量。经0.45μm的滤膜滤过，续滤液供HPLC分析。2.2色谱条件色谱柱为SpherisorbBDSC18（5μm，250mm×4.6mm），流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱（甲醇：0min，30%；10min，30%；30min，50%；40min，60%；50min，30%），流速：1ml·min-1，柱温35℃检，检测波长350nm。在该色谱条件下，芦丁、槲皮素、山萘酚分离良好，且不受药材中杂质的干扰。理论塔板数不小于4000。见图1。图1芦丁、槲

6、皮素、山萘酚对照品色谱图（略）图2杜仲叶样品色谱图（略）2.3线性关系考察分别精密量取对照品溶液依次进样2，5，8，11，14，17，20μl。按“2.2”色谱条件分析，以Y（AV.S）为峰面积，X（μg）为进样量，芦丁、槲皮素、山萘酚方程分别为：Y芦丁=11428X+691.404，r=0.9999、Y槲皮素=2022916X-5760.250，r=0.9998、Y山萘酚=2177870X-6649.655，r=0.9999。结果表明，芦丁、槲皮素、山萘酚分别在0.579～5.79，0.12～1.20，0.109～1.09μg间

7、呈良好的线性关系。2.4精密度实验对同一份杜仲叶样品平行测定5次，芦丁、槲皮素、山萘酚的RSD分别为：0.23%，1.5%，0.53%（n=5）。2.5重复性实验精密称同一份杜仲叶样品5份，按“2.1.3”方法制备供试品溶液，在“2.2”项色谱条件下分别测定，芦丁、槲皮素、山萘酚的RSD分别为：0.76%，0.69%，0.60%（n=5）。2.6回收率实验精密称取已测含量的杜仲药材粉末9份，每份2g，按样品含芦丁、槲皮素、山萘酚的80%，100%，120%精密加入芦丁、槲皮素、山萘酚对照品储备溶液，按“2.1.3”的方法制备供试溶

8、液，进样量10μl。结果芦丁、槲皮素、山萘酚的回收率分别为96%～98%，93%～97%，96%～101%；精密度（RSD）分别为1.7%～2.0%，1.5%～2.7%，0.9%～2.5%(n=3)结果见表1。2.7供试品溶液稳定性实验取同一供试品