高效液相色谱法同时测定杜仲药材中绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的含量

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1、高效液相色谱法同时测定杜仲药材中绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的含量：伍庆，张明时，王兴宁，曹桂红【摘要】　　目的建立同时测定杜仲药材中绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷含量的高效液相色谱法。方法采用DiamonsilC18柱（5μm，250mm×4.6mm），以乙腈-水-0.4%磷酸水溶液（15∶85∶0.5）为流动相，检测波长227nm。结果样品中绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的加样回收率分别为95%～98%，96%～103%；绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的线性范围分别为0.298～2.98μg，r=0.9999和0.872～8.72μg，r=0.9998。结论贵州不同产地杜仲药材皮及叶中绿原酸、松脂醇二葡

2、萄糖苷的含量差异很大。【关键词】高效液相色谱法；杜仲；绿原酸；松脂醇二葡萄糖苷　　Abstract：ObjectiveToestablishaneethodforsimultaneousdeterminationofchlorogenicacid（CGA）andpinoresinddiglucoside（PDG）inE.ulmoidesOliv..MethodsCGAandPDGonsilC18column(5μm，250mm×4.6mm),andthemobilephaseconsistedofCH3-H2O-H2PO3(15∶85∶0.5).ResultsTherecoveries

3、ofCGAandPDGoidesOliv.FromdifferencegroiaulmoidesOliv.；Chlorogenicacid；Pinoresinddiglucoside杜仲属国家二级保护植物，是杜仲科杜仲属的落叶乔木，中国特有植物种，系地质史上第四纪冰川运动残留下来的占生孑遗树种［1，2］。杜仲具有消炎、补肾降压、增强人体免疫力、抗疲劳、抗衰老、多种药理作用，其中，绿原酸（chlorogenicacid，CGA）和松脂醇二葡萄糖苷（pinoresinddiglucoside,PDG）为杜仲药材中重要的活性物质［3，4］。近年来对杜仲药材的研究多限于杜仲叶活性成分的定量分析

4、，而对杜仲皮中这两种活性成分定量分析甚少［5］，为了充分合理的开发利用杜仲资源，本文采用高效液相色谱法同时对杜仲皮及叶中的绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷进行了定性定量分析。方法简便、快速、准确，有助于杜仲药材及产品的质量控制和评价。　　1仪器与试药日本岛津ShimadzuLC-10ATvp高效液相色谱仪，SPD-10Avp检测器，Hl的容量瓶，并稀释至刻度，配置成含绿原酸1.49mg·ml-1,松脂醇二葡萄糖苷4.35mg·ml-1的对照品储备溶液。　　2.1.2对照品溶液　　分别精密吸取对照品储备溶液1ml，置于10ml的容量瓶中，用60%甲醇溶解并稀释至刻度，配置成含绿原酸0.149mg

5、·ml-1，松脂醇二葡萄糖苷0.435mg·ml-1的对照品溶液。　　2.1.3供试品溶液　　精密称取杜仲药材粉末（过60目筛）2g，于100ml锥形瓶中，加入25ml60%甲醇溶液，称定重量，在水浴上回流提取1h，冷却后用相应的醇浓度补足重量。经0.45μm的滤膜滤过，续滤液供HPLC分析。　　2.3线性关系考察　　分别精密吸取对照品溶液依次进样2，5，10，15，20μl。按“2.2”色谱条件进行析，以Y为峰面积（uv.s），X为进样量（μg），绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的回归方程分别为：Y=267175X+1288.1，r=0.9999，Y=188306X+280.73，r=0.9

6、998。　　结果表明绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷分别在0.298～2.98，0.872～8.72μg间呈良好的线性关系。　　2.4精密度实验对同一份杜仲样品平行测定5次，绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的RSD分别为：0.23%，1.5%，n=5。　　2.5重复性实验精密称同一份杜仲样品5份，按“2.2”方法制备供试品溶液，在“2.2”色谱条件下分别测定，绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的RSD分别为：0.76%，0.69%，n=5。　　2.6回收率实验精密称取已测含量的杜仲药材粉末6份，每份2g，按样品含绿原酸及松脂醇二葡萄糖苷的80%，100%，120%精密加入绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷对照品储备溶液，

7、按“2.1.2”的方法制备供试溶液，进样量10μl。结果绿原酸及松脂醇二葡萄糖苷的回收率分别为95%～98%，96%～103%；精密度RSD分别为0.8%～1.7%，1.5%～2.7%，n=3。结果见表1。表1回收率实验结果（略）　　2.7供试品溶液稳定性实验取同一供试品溶液，分别在0，2，4，6，8，10，12h测定，绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷含量的RSD分别为1.7%，2.2%，n=7，表明供试品溶液在12h内稳定。2.8样品的测定分别取贵州