反相高效液相色谱法同时测定重楼药材中4种皂苷的含量

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1、反相高效液相色谱法同时测定重楼药材中4种皂苷的含量【摘要】目的建立RPHPLC法测定重楼中4种甾体皂苷的含量。方法采用色谱柱：ZorbaxeclipseXDBC8,（150mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈水（40∶60），流速1.0ml·min-1；检测波长：203nm；柱温：40℃。结果4种甾体皂苷范围在0.401～4.028μg线性良好，R=0.9996～0.9999，回收率99.1%～103.1%。不同来源的重楼药材中4种甾体皂苷的含量差异较大。结论该方法准确、简捷，为重楼药材的质量控制

2、提供了一定方法和依据。【关键词】重楼；甾体皂苷；反相高效液相色谱法　　Abstract：ObjectiveAprehensiveanalyticalmethodbasedonhighperformanceliquidchromatography-ultravioletdetectionhasbeenestablishedforthesimultaneousdeterminationoffoursteroidalsaponinsinParispolyphylla.MethodsThecolumnmetryC

3、8,mobilephaseedat203nm.ResultsThecalibrationcurvesshoethodissimpleethodforqualitycontrolofParispolyphylla.　　Keym×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-水（40∶60），流速1.0ml·min-1；检测波长：203nm；柱温：40℃。　　2.2对照品溶液的制备精密称取105℃干燥至恒重的4种重楼皂苷对照品各10mg，置50ml容量瓶中加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀使浓度分别为0.2g/L，作为对照品

4、溶液。　　2.3供试品溶液的制备准确称取重楼样品粉（60目）约1g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇20ml，超声处理（功率250in，过滤，残渣用甲醇分次洗涤。重复超声3次，合并每次滤液与洗涤液，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解，过0.45μm滤膜并定容至10ml。　　2.4系统适应性实验按上述方法分别对对照品溶液和供试品溶液分别进样10μl分析，确定各成分峰位置。对照品及供试品溶液色谱图分别见图1～2。由图1可知，4种重楼皂苷的保留时间分别为17.45，20.39，21.54，25.36min。4种重楼皂苷成分与其相

5、邻峰均达基线分离。样品中杂质对重楼皂苷的测定基本无干扰。　　图1对照品HPLC图（略）　　图2样品5HPLC图（略）　　2.5线性关系精密吸取对照品溶液2，5，10，15，20μl进行测定，以对照品进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。回归方程及线性范围如下。　　表14种甾体皂苷线性方程及范围（略）　　2.6精密度实验精密吸取上述对照品溶液10μl，重复进样5次，测得4种重楼皂苷成分峰面积积分值RSD分别为0.27%，0.46%，0.22%，0.60%。　　2.7重现性实验取同一供试样品，分

6、别进行供试品溶液的制备、测定，重复6次，4种重楼皂苷含量的RSD分别为0.84%，3.15%，0.97%，1.24%。　　2.8稳定性实验供试品溶液自制备之日起按色谱条件进行测定，0，4，8，12，24，48，RSD均小于2%，结果表明4种重楼皂苷在48h内均较稳定。　　2.9回收率实验采用加样回收法，取已知含量的重楼样品，分别添加4种对照品，按上述方法进行供试品溶液制备、测定，4种重楼皂苷平均回收率（n=3）依次分别为99.1%，101.0%，103.1%，99.6%。　　2.10样品含量测定用本法对1

7、7个不同产地的重楼药材中4种重楼皂苷进行含量测定，结果见表2，不同来源样品中各成分含量差异较大。其中购自重庆巴南的样品重楼皂苷Ⅱ含量最高，达5.03mg/g；山西稷山、四川南充和四川峨眉的样品中未检测出重楼皂苷Ⅱ。蒲江长秋采集鲜品干燥者中重楼皂苷gri，重楼皂苷Ⅰ和重楼皂苷Ⅴ含量均为最高，分别为35.73，12.71，3.48mg/g；安徽蚌埠的样品中重楼皂苷gri和重楼皂苷Ⅰ含量均为最低，且未能检测出重楼皂苷Ⅴ。　　3讨论　　由于重楼中甾体皂苷溶于水产生大量泡沫，给提取带来困难，所以采用甲醇提取简单易行

8、，提取效果也较好。超声提取中，反复3次已经可以提取完全，并且溶液温度不至于过高。采用C8柱进行试验，检测时间短，各组分分离完全。流动相中乙腈与水的比例大于40∶60时，出峰时间较晚，不易于检测；小于40∶60时出峰太早，各组分分离不完全，所以采用此比例较合适。结果表明，相比于皂苷元的提取方法［6～9］，本方法简单易行，需时较短，对于快速测定重楼药材中主要药用成分皂苷含量具有很好的可操作性。适宜快速鉴别重楼药材真伪及检测重楼药材