反相高效液相色谱法测定白头翁药材中白头翁皂苷b4的含量

《反相高效液相色谱法测定白头翁药材中白头翁皂苷b4的含量》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、反相高效液相色谱法测定白头翁药材中白头翁皂苷B4的含量作者：王蒨，鹿燕敏，薛小平，刘洪斌【摘要】目的建立白头翁药材中白头翁皂苷B4的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法，色谱柱：KromasilC18(250mm×4.6mm，5μm)，以乙腈-0.1%磷酸（28∶72）为流动相，流速：1.0ml·min-1，检测波长：205nm，柱温：30℃。结果白头翁皂苷B4在29.4～147mg·L-1内呈良好线性关系，相关系数为0.9999，平均回收率为99.7%，RSD为1.14%。结论该方法简便、准确、重复性好，可用于白头翁药材的质量控制。【关键词】反相高效

2、液相色谱法；白头翁；白头翁皂苷B4白头翁为毛茛科植物白头翁Pulsatillachinensis（Bge.）Regel的干燥根，味苦，性寒，归胃、大肠经。白头翁始载于《本经》，具有清热解毒，凉血止痢之功效，可用于治疗热毒血痢，阴痒带下，瘰疬，痈肿，秃疮等［1］。其主要有效成分为皂苷类成分，白头翁皂苷B4为其主要有效成分之一，其含量也较高。故本实验采用反相高效液相色谱法对其含量进行测定，对白头翁药材或制剂的质量标准研究具有重要意义。实验结果表明，该方法简便可靠，重现性好，为白头翁药材或制剂的质量控制提供了参考依据。　　1仪器与试剂　　美国Station色谱工作站），KQ320

3、0型超声仪（昆山市超声仪器有限公司）。　　白头翁皂苷B4对照品（中国药品生物制品检定所），白头翁药材由三九药业提供，甲醇为色谱纯（天津市康科德科技有限公司），水为自制重蒸水。　　2方法与结果　　2.1色谱条件色谱柱为KromasilC18(250mm×4.6mm，5μm)，以乙腈-0.1%磷酸（28∶72）为流动相，流速为1.0ml·min-1，检测波长为205nm，柱温为30℃，进样量：10μl。　　2.2溶液的制备　　2.2.1对照品储备液的制备精密称取白头翁皂苷B4对照品1.47mg，加甲醇定容至10ml，制成每1ml含白头翁皂苷B4147μg的溶液，作为对照品溶液。

4、　　2.2.2供试品溶液的制备白头翁药材粉碎后，精密称取药材粉末（过3号筛）0.12g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，超声30min，放冷，过滤，滤液置50ml量瓶中，用少量流动相洗涤容器及残渣，洗液并入同一量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，过0.2μm滤膜即得。　　2.3系统适用性试验取供试品溶液，在上述色谱条件下进样分析，白头翁皂苷B4与相邻色谱峰的分离度大于1.5，理论塔板数不低于3000（图1～2）。　　2.4线性关系考察取对照品储备液，按照不同比例稀释，使白头翁皂苷B4质量浓度分别为29.4，58.8，88.2，117.6，147mg·L-1。分别取上述溶

5、液各10μl进样测定，记录色谱图。以对照品质量浓度X为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线并进行回归计算，回归方程为：Y=2.8844X-2.04(r=0.9999，n=5)。结果表明，白头翁皂苷B4质量浓度在29.4～147mg·L-1内呈良好线性关系。结果见表1。表1标准曲线结果（略）　　2.5仪器精密度实验取同一对照品溶液，按上述色谱条件，重复进样5次，计算白头翁皂苷B4色谱峰面积的RSD为0.32%（n=5）。结果见表2。表2精密度结果（略）　　2.6方法重复性实验取同一批号的样品，按“2.2.2”条方法平行制备5份样品按上述色谱条件进样分析，计算白头翁皂苷B4含

6、量的RSD为1.37%（n=5）。见表3。表3重复性结果（略）　　2.7稳定性实验取同一供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，12h注入液相色谱仪，依法测定。计算白头翁皂苷B4色谱峰面积的RSD为1.47%（n=6）。结果见表4。结果表明，样品溶液在12h内稳定。表4稳定性实验结果（略）　　2.8回收率实验精密称取已知含量的白头翁药材粉末（过3号筛）6份，分别精密加入高、中、低质量浓度的对照品（相当于药材含量的80%，100%，120%，每一质量浓度2份），按上述方法测定分析，白头翁皂苷B4平均回收率分别为99.7%（n=6）（结果见表5）。表5回收率实验结果（略）　　2.

7、9含量测定取3批供试品，按“2.2.2”条操作，在上述条件下进样分析，记录色谱峰面积，采用外标一点法计算白头翁皂苷B4的质量分数为4.9%。　　3讨论　　3.1色谱条件的选择检测波长的选择参照《中华人民共和国药典》2005版（增订）［2］部分的白头翁项下，药典选择测定波长为201nm，流动相选用甲醇和水，我们进行了样品的全波长扫描，发现在200～205nm波长范围内，样品均呈现较强吸收，以甲醇和水为流动相基线极不平稳，参考相关