hplc测定白头翁药材中白头翁皂苷b4含量

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1、HPLC测定白头翁药材中白头翁皂苷B4含量摘要目的：建立白头翁药材白头翁皂苷B4的含量测定方法。方法：运用高效液相色谱法测定，色谱柱为InertsilODS-3C18（5μm250×4．6mm），流动相为乙腈-0．1%磷酸溶液(29:71),流速0．8ml・min-1,柱温为常温;检测波长203nm。结果：白头翁皂苷B�4在0．60～7．2μg之间线性关系良好,r=0．9999。平均回收率为98．5%，RSD小于2．0%。结论：本法方便、准确、灵敏、重复性好，可以用于白头翁药材的质量控制。�关键词白头翁白头翁皂苷B4含量测定高效液相色谱法��白头翁为毛莨科植物白头翁p

2、ulsatillachinensis（Bge．）Regel的干燥根。味苦，寒，归胃、大肠经。白头翁始载于《本经》具有清热解毒，凉血止痢之功效，可用于热毒血痢，阴痒带下，阿米巴痢等［1、2］。其主要有效成分为皂苷类成分，白头翁皂苷B4为其主要有效成分之一，其含量也较高［3］，故建立高效液相色谱法对其含量进行测定，对白头翁药材或制剂的质量标准研究具有很重要的意义。本实验在确定了测定方法后，对白头翁药材中的白头翁皂苷B4进行了含量测定。�1仪器与材料� 5Waters高效液相色谱仪（515HPLCPump，Waters2478Dualλ紫外检测器，威马龙色谱数据工作站）；实

3、验用乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水；白头翁皂苷B�4对照品购于长沙拓康生物制品有限公司（HPLC归一法测定纯度大于98%）；白头翁药材均购于各药材公司。�2方法与结果�2．1色谱条件与系统适用性试验色谱柱为InertsilODS-3C18（5μm250×4．6mm）;流动相为乙腈-0．1%磷酸溶液(29:71);流速0．8ml・min-1;检测波长203nm;进样量对照品、供试品分别进样10μl、20ul；柱温为常温。在此色谱条件下，理论塔板数不小于3000，分离度大于1．5,峰形较好。对照品与样品的色谱图见附图1�附：HPLC测定白头翁皂苷B4色谱图�2．2对照品溶液制

4、备取白头翁皂苷B4对照品6mg,精密称定,加流动相溶解成每1ml含白头翁皂苷B4对照品0．6mg的溶液,作为对照品溶液。�2．3供试品溶液的制备精密称取白头翁药材粉末（过3号筛）0．2g，加甲醇10ml，密塞，超声处理30分钟（功率150W频率40KHz），放冷，滤过，取滤液1ml置蒸发皿中水浴挥干，放冷，加流动相转移至10ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，�匀，过0．45μm滤膜，即得。� 52．4线性关系考察精密吸取白头翁皂苷B4对照品溶液1．0、2．0、4．0、6．0、8．0、10．0、12．0、14．0μl注入液相色谱仪，测定峰面积，以白头翁皂苷B4进样量（μ

5、g）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为Y=�326273．1846X+7558．5482，r=0．9999。结果表明白头翁皂苷B4在0．60~7．2μg与峰面积呈良好的线性关系（数据见表1）。2．5精密度试验精密吸取白头翁皂苷B�4对照品溶液10μl,重复进样5次,记录峰面积,结果精密度良好，RSD为0．80%（结果见表2）。�2．6重复性试验精密称取5份同一批药材粉末（过3号筛）0．2g，同2．3项下方法制备供试品溶液，进样分析，计算白头翁皂苷B�4的含量，结果重复性良好，RSD为1．57%。（结果见表3）��2．7稳定性试验精密称取白头翁药材粉末

6、（过3号筛）0．2g,同2．3项下方法制备供试品溶液，于0、1、2、4、6、8、12、24h分别进样20μl分析，计算白头翁皂苷B�4的含量，结果稳定性良好，RSD为1．61%（结果见表4）。�2．8加样回收率试验精密称取同一批已知含量的白头翁药材粉末（过3号筛）0．1g,共6份(分别按相当于药材含量的80%、100%、120%加入白头翁皂苷B�4对照品溶液)5，同2．3项下方法制备供试品溶液，分别进样分析，由测得量与加入量计算回收率，结果表明回收率良好（结果见表5）。2．9样品测定对购买到的白头翁药材按供试品溶液制备项下方法制备样品溶液,进样分析,以外标法计算其含量

7、(结果见表6)。�3讨论�3．1提取条件的确定实验过程中比较了回流和超声两种常用方便的提取方法，超声提取法明显好于回流提取法（可能高温的影响）；对水、甲醇、70%乙醇、95%乙醇作为提取溶剂进行考察，结果甲醇好于其它溶剂。�3．2检测波长的选取经用紫外分光光度法测定，白头翁皂苷B4在202±1nm处有着最强吸收，经高效液相色谱法测定，在波长203nm下效果较好，故选择203nm为检测波长。�3．3流动相组成的确定在实验过程中笔者考察过CH�3OH-H�2O（不同比例），CH�3OH-0．1%H�3PO�4（不同比例），CH�3CN-CH�3OH-H�