反相高效液相色谱法测定藏药材红毛五加中金丝桃苷的含量

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1、反相高效液相色谱法测定藏药材红毛五加中金丝桃苷的含量作者：李莹　袁玮　刘超　刘圆【摘要】目的建立藏药材红毛五加药材中金丝桃苷的含量测定方法并比较其不同药用部位及不同产地、不同采收期的红毛五加皮中金丝桃苷的含量。方法KromasilC18柱（4.6mm×250mm,5μm）,柱温30℃，流动相甲醇（A）-0.5%磷酸水溶液（B）,梯度洗脱，程序为：基线（A∶B=30∶70）,0～5min(A∶B=35∶65),5～15min(A∶B=40∶60),15～30min（A∶B=50∶50）；检测波长358nm,流速1ml·m

2、in-1。结果金丝桃苷在2.90×10-3～0.58μg范围内峰面积与进样量具有良好的线性关系,回归方程Y=4×106X-14065，r=0.9999(n=9)，平均回收率为100.6%，RSD为0.96%（n=6）。结论该法简便、准确、重复性好,有助于红毛五加质量控制方法的研究。【关键词】红毛五加；金丝桃苷；反相高效液相色谱　　Abstract：ObjectiveTodevelopanRP-HPLCmethodfordeterminationofHyperosideinAcanthopanaxgiraldiiHarm

3、s,andtodeterminethecontentsofHyperosideindifferentparts,differentareasanddifferentcollectiontimeofAcanthopanaxgiraldiiHarms.MethodsTheanalysisasilC18columnelutedobilephaseconsistedofmethanol(A)-0.5％phosphoricacid(B).Thegradientelution0to5min.iiTheratioofAandB5to

4、15min.ⅲTheratioofAandB15to30min.Thedetectivel/min.ResultsThecalibrationcurveethodissimple,accurateandreproducible.ItisusefulforqualitycontrolofAcanthopanaxgiraldiiHarms.　　Keys;Hyperoside;RP-HPLC藏药材红毛五加为五加科五加属植物AcanthopanaxgiraldiiHarms的干燥茎皮。《中国药典》尚未收载红毛五加药材。在　　2

5、.8样品测定　　精密称取红毛五加的不同药用部位及不同产地、不同采收期的红毛五加皮（过40目筛）2g。按“2.2.2”项下方法制备样品溶液，按照“2.1”项下色谱条件测定。结果见表1～3，色谱图见图1。表1红毛五加不同部位金丝桃苷的含量（略）表2不同产地红毛五加皮中金丝桃苷的含量（略）表3不同采收期红毛五加皮中金丝桃苷的含量（略）从实验结果来看，红毛五加各部位中叶中金丝桃苷的含量最高:645.31μg/g；四川阿坝茂县的红毛五加皮中金丝桃苷含量明显高于其他产地，为179.42μg/g；6月份的红毛五加皮中金丝桃苷含量最高

6、，为112.03μg/g。　　3讨论　　3.1检测波长的选择　　以流动相作溶剂，在200～400nm波长范围内测定了金丝桃苷对照品的紫外光谱图，结果在256nm和358nm波长处有最大吸收，确定358nm为检测波长。　　3.2提取方法的选择　　实验中曾分别考察了用甲醇作为提取溶剂超声0.5h［9］，超声1h［10］，醋酸乙酯索氏提取［11］以及石油醚先脱脂，再加甲醇回流的提取方法［12］等4种方法测定同批试样的含量，经比较最后一种方法提取的最为完全，故采用石油醚先脱脂，再加甲醇回流的提取方法。　　3.3流动相的选择　　

7、实验曾考察了乙腈-0.05%磷酸水溶液（16∶84）［13］、甲醇-0.1%磷酸溶液（40∶60）［10］、甲醇∶0.2%磷酸溶液（45∶55）［14］为流动相，金丝桃苷的保留时间相对短些，但不能与其它化合物很好地分离。采用本文选择的梯度洗脱，可以达到基线分离，峰形对称，分离度好。　　3.4不同入药部位药效成分含量　　从入药部位来看，藏药材红毛五加的叶中金丝桃苷的含量最高，明显高于红毛五加皮中金丝桃苷的含量，与结合本课题组的前期研究成果相一致［15］，但是红毛五加叶能否同等入药，还需要进行更多化学成分分析和药理实验研究

8、。　　3.5不同产地或采收期药效成分含量　　从不同产地来看，采自四川阿坝藏族羌族自治州茂县的红毛五加皮中金丝桃苷含量明显高于其它产地。从不同采收期来看，6月份的红毛五加皮中金丝桃苷含量最高。从实验结果来看，红毛五加药材中金丝桃苷的含量除叶以外，其它含量值均低于0.05%，但仍为其质量评价提供了一定的科学依据。【参考