反相高效液相色谱法测定照山白中金丝桃苷的含量论文

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1、反相高效液相色谱法测定照山白中金丝桃苷的含量论文【摘要】目的建立照山白中金丝桃苷的高效液相色谱法。方法采用DiamonsilTMC18(4.6mm×250mm,.freel)色谱柱，以甲醇-5%磷酸溶液-三乙胺（44∶56∶0.37）为流动相，检测波长为360nm，流速为1.0ml/min。结果金丝桃苷在0.05～0.28μg范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9998，n=6）,平均回收率为99.83%（n=5）,RSD为0.90%。结论该方法快速、简便，结果准确，可用于照山白中金丝桃苷的质量控制。【关键词】反相高效液相色谱金丝桃苷照山白RPHPLCDeterminationofHyp

2、erininManchurianrhododendronLeafSUNHeying，FUPingping.freelaceuticsCo.，Ltd.，Baoding072656,ChinaAbstract:ObjectiveToestablishanRPHPLCmethodforthedeterminationofHyperininManchurianrhododendronLeaf.MethodsTheDiamonsilTMC18(4.6mm×250mm,5μm)obilephaseethanol-5%phosphoric-triethylamine（44∶56∶0.37）.Thefl

3、ol/min,thedetective.20μlsamplerandexternalmethodethodisquickandsimpleination；Hyperin；ManchurianrhododendronLeaf照山白为双子叶植物药杜鹃花科植物小花杜鹃的枝叶或花，具有祛痰止咳、通络止痛等功效，可用于治疗急慢性气管炎、哮喘、痛经、产后周身疼痛等病症，其主要成分为各种黄酮类成分，如金丝桃苷及多种皂苷及多糖类等［1］。有报道应用高效液相色谱法，以甲醇－3%醋酸溶液等为流动相，测定山楂等不同药材中金丝桃苷的含量［2～4］。本实验采用RPHPLC法，以甲醇5%磷酸溶液三乙胺为流动相，实现

4、了对照山白中金丝桃苷的准确分析。现报道如下。1仪器与试药C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为甲醇-5%磷酸-三乙胺（44∶56∶0.37）；检测波长为360nm；流速1.0ml/min；进样量20μl；室温进样。在上述色谱条件下，金丝桃苷峰形良好，无杂质峰干扰，以金丝桃苷计算的理论塔板数大于5000，保留时间约为15min，与相邻色谱峰的分离度均大于1.5，见HPLC图。2.2实验溶液的制备2.2.1对照品溶液的制备精密称取金丝桃苷对照品11.60mg，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.232mg/ml的溶液；分别精密量取0.10，0.20，0

5、.30，0.40，0.50，0.60ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。2.2.2供试品溶液的制备取照山白药材适量，粉碎，过20目筛，取约0.2g，置50ml圆底烧瓶中，精密加入90%乙醇20ml，称定总重量，加热回流1h。精密称定，加90%乙醇补足损失量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2ml，置10ml量瓶中，加90%乙醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。2.3方法学考察2.3.1线性关系考察精密量取对照品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录峰面积。以进样量（μg）为横坐标，相应峰面积为纵坐标，进行线性回归。结果在0.05～0

6、.28μg范围内，金丝桃苷进样量与峰面积呈良好的线性关系，回归方程为Y＝8.7531X－0.0152，r＝0.9998。2.3.2精密度实验取照山白药材适量，粉碎，过20目筛，取约0.2g，精密称定，按2.2.2项下方法制备供试品溶液。精密量取20μl，注入液相色谱仪，重复进样5次，所得峰面积的RSD为0.23%（n=5），表明本方法的精密度较好。2.3.3稳定性实验取同一供试品溶液，分别于0，1，2，4，8，12h，进样20μl，记录峰面积，结果峰面积基本不变，RSD为0.39%（n=6），表明供试液至少在12h内稳定。2.3.4重复性实验精密称取同一批号的样品5份，分别按样品测定项下方法进

7、行测定，取照山白药材细粉，精密称取5份，每份约0.2g，按2.2.2项下方法制备供试品溶液。精密量取20μl，注入液相色谱仪，按峰面积计算。求得平均含量为0.49%，计算RSD为1.1%（n=5），说明本方法的重复性较好。2.3.5回收率实验取已测定含量的照山白药材适量，粉碎，过20目筛，取约0.1g（5份），分别精密量取金丝桃苷对照品溶液（精密称取金丝桃苷对照品3.18mg，置5ml量瓶中，用9