高效液相色谱法同时测定银杏叶提取物中5种黄酮类成

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1、高效液相色谱法同时测定银杏叶提取物中5种黄酮类成【摘要】目的建立反相高效液相色谱法同时测定银杏叶提取物中5种黄酮类成分芦丁、槲皮苷、槲皮素、山奈酚、异鼠李素的含量。方法采用70%甲醇提取样品，以KromasilC18为固定相，甲醇-0.1%甲酸水溶液为流动相，线性梯度洗脱，流速1.0ml/min；柱温：40℃；检测波长：360nm；结果芦丁、槲皮苷、槲皮素、山奈酚、异鼠李素的定量限分别为0.03、0.02、0.008、0.006、0.005mg/L，芦丁、槲皮苷、槲皮素、山奈酚、异鼠李素分别在2.02～50.5、1.932～48.3、2.

2、01～50.4、0.49～12.3、0.39～9.8mg/L浓度范围内其峰面积与浓度的线性关系良好（r＞0.9992），回收率为86.5%～99.2%，日内精密度及日间精密度的变异系数分别小于2%、3%。结论本方法简单、准确，为银杏叶提取物中黄酮类成分的质量控制提供了依据。【关键词】高效液相银杏叶提取物Abstract:ObjectiveTodescribeahighperformanceliquidchromatographic(HPLC)methodtoquantitatefiveflavonolponentsintheextract

3、ofGinkgobiloba(EGb).MethodsThefiveflavonolsofEGbethanolandseparatedbypassingthroughakromasilC18column(250×4.6mm,5μm)at40℃ethanol∶0.1%formicacidataflol/min.ResultsThelimitsofquantitationforrutin,quercitrin,quercetin,kaempferolandisorhaming/L,respectively.Thismethodg/Lrespe

4、ctively（r＞0.9992）.Theratesofrecoveryforthefiveponentsranged86.5%～99.2%,ethodissimpleandaccurate,andhence,canbevalidatedasameansofferingthebasisforthequalitycontrolofflavonolsinEGb.Keyanceliquidchromatography;extractofGinkgobiloba银杏叶为银杏科植物银杏（GinkgobilobaL.）的干燥叶［1］，其提取物（ext

5、ractofGinkgobiloba，EGb）是经现代提取工艺从银杏叶中提取的活性物质，其主要活性化学成分为两大类：黄酮类及萜类［2］。黄酮类成分包括单黄酮、黄酮醇苷、乙酰化黄酮醇苷、双黄酮、黄烷-3-醇类以及原花色素等，其中黄酮醇苷在银杏叶中含量最丰富，大部分黄酮醇苷结构已经通过其水解后的苷元如槲皮素、山奈酚、异鼠李素等得到证实［3］。目前，银杏叶提取物及其制剂的质量控制多采用指纹图谱的方法进行［4-5］，国际上一般公认EGb质量指标为含黄酮24％以上、内酯6％以上。国内药厂生产的银杏叶制剂多以总黄酮的含量来控制其质量［6-7］。为实现

6、其质量可控，许多学者以黄酮类成分如槲皮素、山奈酚、异鼠李素及内酯类成分如银杏内酯A、B、C等指标成分为对象进行研究。由于黄酮类化学成分具有很强的紫外吸收特性，因此其测定方法主要采用反相高效液相色谱法结合紫外或二极管阵列检测器进行［8］；而Li和Fitzloff［9］则利用高效液相色谱结合蒸发光散射检测器建立了同时测定银杏叶提取物中黄酮苷元及萜类内酯含量的方法。本实验利用高效液相色谱结合紫外检测方法同时测定银杏叶提取物中5种黄酮类化合物芦丁、槲皮苷、槲皮素、山奈酚及异鼠李素的含量。1材料和方法1.1仪器与试剂ShimadzuLC-10A高效

7、液相色谱仪（日本岛津制作所），包括SCL-10AvpSystemController、SPD-10AvpUV-VISDetector、LC-10ADvp两元泵、7725i进样器、HC，无锡超声电子设备有限公司）；梅特勒托利多AE240电子天平（1/100000，瑞士MettlerToledo）；甲醇（色谱纯，美国FisherScientific公司）。水为双蒸水，其余试剂为分析纯。对照品银杏叶提取物（110866-200202）、芦丁(100080-200306)、槲皮苷（111538-200302）槲皮素(100081-200406)、

8、山奈酚(110861-200606)、异鼠李素(110860-200407)，均购自中国药品生物制品检定所。样品EGbA（20060725）、EGbB（20070213）、EGbC（20061