高效液相色谱法同时测定丹参提取物中4种成分的含量

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1、万方数据高效液相色谱法同时测定丹参提取物中4种成分的含量邱丽丽1，容蓉¨，蒋海强2，韩艳春3，李聪1(1．山东中医药大学硕士研究生，济南250355；2．山东中医药大学药学院，济南250355；3．山东中医药大学药学院2003级本科生，济南250355)摘要：建立反相高效液相色谱法同时测定丹参醇提物和超临界提取物中原儿茶醛、丹酚酸B、隐丹参酮和丹参酮ⅡA含量的方法。采用RP．HPLC梯度洗脱的方法进行测定，色谱条件为：AgilentC18柱(5邮，4．6×250mm)；以1％醋酸乙腈．1％醋酸水为流动相进行梯度洗脱；检测波长：0～2

2、5min(280啪)，25—60min(270衄)；流速0．5mL／min；柱温：35℃。测定了丹参醇提取及超f临界提取物中以上4种成分的含量；4种成分线性关系均良好(r>0．9995)，平均加样回收率均大于95．0％，RsD均小于3．O％。该方法一次进样，可以同时测定丹参中水溶性成分原儿茶醛和丹酚酸B、脂溶性成分隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量。关键词：丹参；原儿荼醛；丹酚酸B；丹参酮ⅡA；隐丹参酮；高效液相色谱丹参为唇形科植物丹参(SalviamihiorrhizaBge．)的干燥根及根茎。其味苦，微寒，归心、肝经。具有祛淤止痛，活血

3、通经，清心除烦之功效uJ。丹参化学成分主要为脂溶性丹参酮类和水溶性酚酸类。其脂溶性化学成分主要包括丹参酮I、丹参酮ⅡA和丹参酮ⅡB、隐丹参酮、羟基丹参酮及异丹参酮I、异丹参酮Ⅱ等，均具有保护心肌缺血缺氧、抑制血小板聚集的功能，还具有明显的抗肿瘤作用；其水溶性成份主要为丹酚酸A、B、C、D、E、F、G、原儿茶醛、原儿茶酸等丹酚酸类化合物，具有抗血栓、改善血液循环、抗氧化损伤等作用乜]。药理研究表明丹参酚酸类成分具有抗血小板聚集、抗血栓形成、改善微循环、抗氧化损伤和心肌保护等作用[3】。有文献报道用RP-HPLC测定丹参药材或制剂中水溶

4、性成分[4'51或脂溶性成分[6“1的含量，但少见报道可以一次同时测定丹参中水溶性和脂溶性成分含量的简便方法。本文以水溶性成分原儿茶醛和丹酚酸B、脂溶性成分隐丹参酮和丹参酮ⅡA为特征指标，建立RP-HPLC梯度洗脱同时测定4种成分含量的方法。1实验部分1．1仪器与试剂Agilent1100高效液相色谱仪(肼m检测器，二元高压梯度泵，柱温箱，自动进样器；美国安捷伦公司)；色谱数据采集与处理由Agilent化学工作站完成；spre．end型超临界萃取仪(美国AppliedSepa．rations公司)；MettlerAE240电子天平(

5、瑞士梅特勒公司)；移液器(20、200、1000止，德国Eppendorf公司)。实验所用丹参药材购自济南建联药店，经山东中医药大学药学院周凤琴教授鉴定，为唇形科植物丹参SalviamiltiorrhizaBge．的干燥根及根茎；原儿茶醛对照品、丹酚酸B对照品、隐丹参酮对照品、丹参酮ⅡA对照品(中国药品生物制品检定所，含量测定用，批号分别为：0810-9803、111562-200403、0766200011、852．9902)；乙腈(色谱纯，美国TEDIA公司)；水为娃哈哈纯净水；其它试剂均为分析纯(天津科密欧化学试剂开发中心)。

6、2方法与结果2．1溶液制备2．1．1混合对照品溶液精密称取原儿茶醛、丹t1．基金项目：山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(02BS085)项目资助作者简介：邱丽丽(19s3一)，女，硕士研究生；E-mail：qiuliasdmcm@126．coin、r．tong@sdutem．edu．on一23—万方数据第28卷增刊2009年5月分析试验室—Chin—eseJoumalof删ysisLabora—toryV01．28．Suppl．2∞9—5酚酸B、隐丹参酮和丹参酮ⅡA对照品适量分别置于不同体积的量瓶中，以甲醇溶解并稀释至刻度，制得质

7、量浓度为原儿茶醛0．499mg，mL、丹酚酸B3．030mg／mL、隐丹参酮0．960m#mL、丹参酮ⅡA1．010n唔／mL的对照品母液。分别精密吸取上述对照品母液各1mL，置同一50mL量瓶中，以甲醇稀释至刻度，制得质量浓度分别为原儿茶醛0．00998n唱／mL、丹酚酸B0．0606m#mL、隐丹参酮0．0192mg，mL、丹参酮ⅡA0．0202mg／mL的混合对照品溶液，摇匀。2．1．2丹参醇提供试液取丹参药材粉末(过40目筛)500g，精密称定，置圆底烧瓶中，加入10倍量、10倍量的70％的乙醇加热回流各1．5h，放冷过滤，

8、合并2次滤液，减压浓缩至500mL，得到丹参醇提物(皿)。精密量取醇提物0．1mL，至10mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用O．45脚的微孔滤膜滤过，取续滤液，得丹参醇提(髓)供试液(相当于生药浓度0．01g，mL)。2．1．3丹