高效液相色谱法测定地龙配方颗粒中次黄嘌呤的含量论文

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1、高效液相色谱法测定地龙配方颗粒中次黄嘌呤的含量论文【摘要】目的测定地龙配方颗粒中次黄嘌呤的含量。方法采用反相高效液相色谱法。色谱柱：InertsilODS-EP柱，流动相：水-甲醇-四氢呋喃（100∶0.5∶0.5），流速：1.0ml·min-1，检测波长：254nm。结果次黄嘌呤在0.0406～0.4060μg间与峰面积呈良好的线性关系，r＝0.9999；平均加样回收率为97.6%，RSD为0.63%（n=9）。结论该法操作简便、准确，可用作为该制剂的含量测定方法。【关键词】地龙配方颗粒次黄嘌呤反相高效液相色谱Abstract：ObjectiveTodeterm

2、inethecontentofHypoxanthineinPheretimapoundingGranules.MethodsAnRP-HPLCatographiccolumnobilephasel·min-1,.freel.ResultsHgpoxanthineshoethodissimple,accurateandcanbeusedforcontentdeterminationofPheretimapoundingGraunles.KeyapoundingGranules;Hypoxanthine;RP-HPLC地龙为巨蚓科动物参环毛蚓或正蚓科动物背暗唇蚓等的全

3、虫体。性味咸寒，有清热、平肝、定喘、通络之功效.freelm×4.6mm，5μm，迪马公司）；流动相为水-甲醇-四氢呋喃（100∶0.5∶0.5）；流速为1.0ml·min-1；检测波长为254nm。柱温：室温。分别取对照品溶液，供试品溶液和阴性样品溶液20μl注入色谱仪，按上述色谱条件，记录色谱图（图1～3）。次黄嘌呤与样品中相邻色谱峰分离较好（R＞1.5），理论板数以次黄嘌呤峰计算应不低于2600，保留时间约5.5min。图1次黄嘌呤对照品HPLC图（略）图2地龙配方颗粒样品HPLC图（略）图3阴性对照样品HPLC图（略）2.2供试品溶液的制备取本品研细的粉末

4、约0.075g，精密称定，置于25ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。2.3阴性对照品溶液的制备方法同供试品溶液的制备相同。2.4对照品溶液的制备精密称取次黄嘌呤对照品20.30mg，置于100ml容量瓶中，加水超声处理溶解并稀释至刻度，摇匀，使成0.203mg·ml-1贮备液，再精密吸取贮备液10ml置于100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得次黄嘌呤浓度为0.0203mg·ml-1的对照品贮备液，分别精密吸取一定量的对照品0.0203mg·ml-1贮备液用水稀释成浓度为2.03，4.06，8.12，10.15，12.1

5、8，16.24，20.30μg·ml-1对照品溶液，摇匀，即得。2.5线性关系考察分别精密吸取不同浓度的对照品溶液各20μl，注入液相色谱仪测定，以峰面积（A）对对照品溶液浓度（C）进行回归，得回归方程A＝41342C+6140.3，r＝0.9999。实验表明次黄嘌呤在0.0406～0.4060μg范围内与峰面积有良好的线性关系。2.6精密度实验取浓度为8.12μg·ml-1的次黄嘌呤对照品溶液20μl，注入液相色谱仪连续测定5次，记录峰面积并计算，结果次黄嘌呤峰面积的平均值为338681，RSD为1.01%（n＝5），表明仪器精密度良好。2.7稳定性实验取地龙配

6、方颗粒供试品溶液（批号0409959），在0，2，3，4，6，8h进样20μl，记录峰面积，结果次黄嘌呤峰面积的平均值为194873，RSD为1.46%，表明供试品溶液在8h内稳定。2.8重现性实验取同一批号（批号0409959）样品6份，按样品“2.10”项方法测定，结果次黄嘌呤平均含量为1.5614mg·g-1，RSD为1.96%，表明分析方法精密度良好。2.9加样回收率实验精密称取已知含量（批号0409959）的地龙配方颗粒样品约0.0750g，共9份，分别精密加入浓度为0.203mg·ml-1的次黄嘌呤对照品贮备液，3.8，3.8，3.8，7.6，7.6，

7、7.6，11.4，11.4，11.4ml，按“2.2”项方法下制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样20μl进行分析。结果见表1。表1加样回收率测定结果（略）2.10样品测定取不同批号地龙配方颗粒剂样品5批，按“2.2”项方法下制备供试品溶液，另精密吸取浓度为8.12μg·ml-1的次黄嘌呤对照品溶液和制备的供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，计算次黄嘌呤的含量。结果见表2。表2样品测定结果（略）3讨论3.1供试品溶液制备的选择分别考察了水和不同浓度的乙醇（10%～95%）溶液溶解样品，测定次黄嘌呤的含量，结果水溶解提取的含量最高，而乙醇随浓度增加次黄嘌呤的含

8、量降低。说