一种高效分离大黄酚和大黄素甲醚的简便方法论文

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1、一种高效分离大黄酚和大黄素甲醚的简便方法论文王定勇，陈铭祥，冯玉静【摘要】目的研究大黄酚和大黄素甲醚混合物的高效分离方法。方法采用硅胶柱色谱进行分离，薄层色谱跟踪检测，HPLC检测产品纯度。结果在以工业级柱层析硅胶（100～200目）为填充剂的色谱柱上，以石油醚乙酸乙酯甲酸(体积比100∶1∶0.5)为洗脱剂，可以将大黄酚和大黄素甲醚完全分离。结论硅胶柱色谱可以实现大黄酚和大黄素甲醚的高效分离；产品经HPLC检测，纯度达99%以上。【关键词】柱色谱法；大黄酚；大黄素甲醚Abstract:Objective

2、Tostudytheefficientandsimplemethodofseparationofchrysophanolandphyscion.MethodsUsingsilicagelcolumnchromatographyforseparation,.freelnchromatography［100～200mesh,petroleumetherethylacetateformicacid(100∶1∶0.5)aselute］.ConclusionChrysophanolandphyscioncould

3、beeffectivelyseparatedbysilicagelcolumnchromatography.Theirpuritiesethod.Keynchromatography；chrysophanol；physcion大黄(RheumofficinaleBaill.)为常用中药,具有泻下、抗菌、抗肿瘤、抗高脂血症、降低血压、健胃、利胆、保肝、强心、消炎、延缓衰老、调节免疫等作用［1］。大黄的主要有效成分是其中的5种游离蒽醌类化合物（见图1）.freelainactiveanthraquinonesof

4、Rheumofficinale1仪器与试剂1.1仪器RE52cs旋转蒸发器（巩义市英峪予华仪器厂）；电子恒温水浴锅（深圳市国华仪器厂）；SHBⅢ循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。1.2试剂大黄酚和大黄素甲醚混合物（自制，从大黄中分离得到）；柱层析硅胶（工业级，100～200目，青岛海洋化工厂）；薄层层析硅胶G（化学纯，青岛海洋化工厂）；石油醚、乙酸乙酯、三氯甲烷等均为分析纯（天津市富宇精细化工有限公司）；大黄酚和大黄素甲醚对照品（中国药品生物制品检定所）。2方法与结果2.1薄层硅胶板的制备配制

5、质量分数为0.3％的羧甲基纤维素钠(CMCNa)水溶液，与薄层层析硅胶G粉，按3mL∶1g的比例配制调浆，以载玻片作为载体铺板，铺好后晾干，于105℃下活化1h，放入干燥器中，备用。2.2色谱柱的制备取一根内径和长度合适的玻璃层析柱，用洗脱剂湿法装柱，用手轻敲柱子，使硅胶装填结实且顶端平整，有效柱长控制在20cm左右，硅胶用量为样品量的200倍。2.3样品的制备大黄酚和大黄素甲醚的混合物用最少量的三氯甲烷溶解，再加入适量硅胶拌样（硅胶∶样品=20∶1，质量比），待氯仿挥发干后均匀铺于柱顶。2.4洗脱以石油醚

6、（60～90℃）乙酸乙酯甲酸(体积比100∶1∶0.5)为洗脱剂，进行洗脱，洗脱液减压浓缩后可循环利用。2.5色谱带的定位洗脱一定时间后可以看见两段明显的色谱带，洗脱得快的那一段为大黄酚，较慢的那一段为大黄素甲醚。继续洗脱，分别得到橙红色颗粒状结晶（大黄酚）和橙黄色针状结晶（大黄素甲醚）。2.6薄层色谱鉴定取制备好的薄层硅胶板，以石油醚乙酸乙酯甲酸（体积比10∶1∶0.5）为展开剂，以对照品作对照，确定橙红色颗粒状结晶为大黄酚，橙黄色针状结晶为大黄素甲醚。2.7大黄酚和大黄素甲醚纯度的HPLC检测方法

7、(归一化法)色谱柱为DiamonsilC18(250mm×4.6mm，5μm)，柱温为30℃，进样量为10μL，流动相为甲醇质量分数为0.1％的磷酸溶液(体积比85∶15)，流速为1.0mL/min，检测波长为254nm。检测结果表明大黄酚纯度为99.01%，大黄素甲醚纯度为99.06%。色谱图见图2、3。图2大黄酚的HPLC图（略）Fig.2HPLCofchrysophanol图3大黄素甲醚的HPLC图（略）Fig.3HPLCofphyscion3讨论3.1大黄酚和大黄素甲醚的分离研究，国内已有多篇文献报

8、道：将样品先用经预处理的一定粒度的磷酸氢钙柱层析，然后用苯［7］或石油醚［8］洗脱，但此操作繁琐、费时，且苯的毒性较大；用纤维素柱层析易于分离、洗脱剂较单一(水饱和石油醚)，但纤维素粉制备费时［9］；也有人用薄层硅胶常压湿柱层析，然后用石油醚丙酮或石油醚乙酸乙酯(体积比15∶1)［10］洗脱，虽然洗脱速度很快，但两者的分离度不是很理想。本文用工业级柱层析硅胶（100～200目）作柱层析进行分离，