一种高效分离大黄酚和大黄素甲醚的简便方法

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1、一种高效分离大黄酚和大黄素甲醚的简便方法作者：王定勇，陈铭祥，冯玉静【摘要】目的研究大黄酚和大黄素甲醚混合物的高效分离方法。方法采用硅胶柱色谱进行分离，薄层色谱跟踪检测，HPLC检测产品纯度。结果在以工业级柱层析硅胶（100～200目）为填充剂的色谱柱上，以石油醚乙酸乙酯甲酸(体积比100∶1∶0.5)为洗脱剂，可以将大黄酚和大黄素甲醚完全分离。结论硅胶柱色谱可以实现大黄酚和大黄素甲醚的高效分离；产品经HPLC检测，纯度达99%以上。【关键词】柱色谱法；大黄酚；大黄素甲醚　　Abstract:ObjectiveTostudytheefficientandsimplemeth

2、odofseparationofchrysophanolandphyscion.MethodsUsingsilicagelcolumnchromatographyforseparation,TLCfortrackinganddetection,HPLCforpuritydetectionoftheproducts.ResultsChrysophanolandphyscioncouldbepletelyseparatedbyindustrialsilicagelcolumnchromatography［100～200mesh,petroleumetherethylacetate

3、formicacid(100∶1∶0.5)aselute］.ConclusionChrysophanolandphyscioncouldbeeffectivelyseparatedbysilicagelcolumnchromatography.Theirpuritiesethod.　　Keynchromatography；chrysophanol；physcion　　大黄(RheumofficinaleBaill.)为常用中药,具有泻下、抗菌、抗肿瘤、抗高脂血症、降低血压、健胃、利胆、保肝、强心、消炎、延缓衰老、调节免疫等作用［1］。大黄的主要有效成分是其中的5种游离蒽醌类化

4、合物（见图1），例如，大黄酸具有抗肿瘤、抗炎、抗菌及调节肾功能等作用［2］；大黄素具有抑菌、抗炎、保护肝肾、抑制血小板聚集、改善微循环、抗癌等作用［3］；芦荟大黄素具有清除氧自由基、诱导肿瘤细胞凋亡等作用［4］；大黄素甲醚可通过血脑屏障，具有很强的抗炎作用［5］；大黄酚具有抗衰老作用、止血作用［6］。大黄酸、大黄素和芦荟大黄素可以通过简单的pH梯度萃取法和重结晶得到单体，而大黄酚和大黄素甲醚在植物体内常共同存在，它们结构相似，酸性与极性相近，分离很困难。大黄酚和大黄素甲醚不仅具有较好的药理活性，而且大黄酚通过氧化反应可以转化为大黄酸，通过卤代和水解反应可以转化为芦荟大黄素；大黄

5、素甲醚通过脱甲基化反应可以转化为大黄素。因此，大黄酚和大黄素甲醚单体的简单获取具有重要意义。我们在大黄的综合深加工研究中，得到了大量大黄酚和大黄素甲醚的混合物，并通过多次实验探索，找出了一种快捷、简单、高效的分离方法，现报道如下。　　图1大黄中5种主要游离蒽醌类化合物的结构式（略）　　Fig.1ThestructuresoffivemainactiveanthraquinonesofRheumofficinale　　1仪器与试剂　　1.1仪器　　RE52cs旋转蒸发器（巩义市英峪予华仪器厂）；电子恒温水浴锅（深圳市国华仪器厂）；SHBⅢ循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限

6、公司）。　　1.2试剂　　大黄酚和大黄素甲醚混合物（自制，从大黄中分离得到）；柱层析硅胶（工业级，100～200目，青岛海洋化工厂）；薄层层析硅胶G（化学纯，青岛海洋化工厂）；石油醚、乙酸乙酯、三氯甲烷等均为分析纯（天津市富宇精细化工有限公司）；大黄酚和大黄素甲醚对照品（中国药品生物制品检定所）。　　2方法与结果　　2.1薄层硅胶板的制备　　配制质量分数为0.3％的羧甲基纤维素钠(CMCNa)水溶液，与薄层层析硅胶G粉，按3mL∶1g的比例配制调浆，以载玻片作为载体铺板，铺好后晾干，于105℃下活化1h，放入干燥器中，备用。　　2.2色谱柱的制备　　取一根内径和长度合适的玻璃

7、层析柱，用洗脱剂湿法装柱，用手轻敲柱子，使硅胶装填结实且顶端平整，有效柱长控制在20cm左右，硅胶用量为样品量的200倍。　　2.3样品的制备　　大黄酚和大黄素甲醚的混合物用最少量的三氯甲烷溶解，再加入适量硅胶拌样（硅胶∶样品=20∶1，质量比），待氯仿挥发干后均匀铺于柱顶。　　2.4洗脱　　以石油醚（60～90℃）乙酸乙酯甲酸(体积比100∶1∶0.5)为洗脱剂，进行洗脱，洗脱液减压浓缩后可循环利用。　　2.5色谱带的定位　　洗脱一定时间后可以看见两段明显的色谱带，洗脱得快的那一段为大