反相高效液相色谱法测定复方大黄颗粒中大黄素和大黄酚的含量论文

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1、反相高效液相色谱法测定复方大黄颗粒中大黄素和大黄酚的含量论文【关键词】复方大黄颗粒；,,,大黄素；,,,大黄酚；,,,高效液相色谱法摘要：目的建立反相高效液相色谱(RPHPLC)法测定复方大黄颗粒中大黄素和大黄酚的含量。方法AlltimaC18色谱柱（5μm,150mm×4.6mm）；柱温：30℃；流动相：甲醇0.1%磷酸（87∶13）；流速：1ml/min；检测波长：254nm。结果大黄素的线性范围为0.096~0.576μg（r=0.9999），平均回收率为99.29%，RSD为0.63%；大黄酚的线性范围为0.0784~0.4704μg（r=0.9998），平均回收率为100

2、.08%，RSD为1.52%。结论该方法灵敏度高、操作简便、重现性好、效率高。可作为样品的检测方法。关键词：复方大黄颗粒；大黄素；大黄酚；高效液相色谱法DeterminationofEmodinandChrysoplhanolinpoundRhubardGranulabyRPHPLCAbstract:ObjectiveTodevelopanRPHPLCmethodfordeterminationofemodinandchrysophanolinpoundRhubardGranula.MethodsThesamplesinedbyRPHPLCaC18column(5μm,150mm×

3、4.6mm)andUVdetectorat254nm.Themobilephaseethonal∶0.1%H3PO4(87∶13)ataflol/min.Thecolumntemperatureodinethodissimple,reliable,efficient,anditprovidesareliablemethodfordeterminationofemodinandchrysophanolinpoundRhubardGranula.Keyodin;Chrysophanol;HPLC复方大黄颗粒由大黄、牡丹皮、丹参、延胡索等多味中药组成，具有清热凉血、活血化淤、消肿止痛等作

4、用。大黄能逐瘀通经、凉血解毒、清热泻火，为方中君药，现代药理研究证明其主要有效成分大黄素、大黄酚等成分具有抗病原体、抗炎、免疫调节、改善微循环等药理作用［1］。为了有效地控制药品质量.freelaC18色谱柱（5μm,150mm×4.6mm）；柱温：30℃；流动相：甲醇0.1%磷酸（87∶13）；流速：1ml/min；检测波长：254nm；灵敏度0.1AFUS。2.2对照品溶液的制备精密称取大黄素对照品12.0mg，置25mg容量瓶中，加甲醇使溶解，并定容至刻度，摇匀，得对照品贮备液。再精密吸取大黄素对照品贮备液1ml，置10ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，作为大黄素对照品溶液

5、（浓度为：0.048mg/ml）；另取大黄酚对照品9.8mg，置25mg容量瓶中，加甲醇使溶解，并定容至刻度，摇匀，得对照品贮备液。再精密吸取大黄酚对照品贮备液1ml，置10ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，作为大黄酚对照品溶液（浓度为：0.0392mg/ml）。2.3供试品溶液的制备取同批号复方大黄颗粒5袋，混匀后，碾细，取约4g，精密称定，置10ml锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5ml，收干甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液10ml，超声处理5min，再加氯仿10ml，加热回流1h

6、，冷却，置分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，并入分液漏斗中，分取氯仿层，酸液用氯仿提取3次，约10ml/次。合并氯仿液，回收氯仿，残渣用甲醇溶解，转移至25ml量瓶中，定容，即得。2.4阴性对照溶液的制备取阴性样品（不含大黄）4g，精密称定，按“供试品溶液的制备”项下方法依法制备，即得阴性对照溶液。2.5干扰实验照上述色谱条件，吸取上述4种溶液各10μl，分别注入液相色谱仪。供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上，有一相同的色谱峰，而阴性在此保留时间无干扰（见图1~4）（大黄素保留时间为12.5min，大黄酚保留时间为9.4min）。图1大黄素对照品色谱图（略）图2大黄酚对照品色谱图（

7、略）图3复方大黄颗粒色谱图（略）图4缺大黄阴性色谱图（略）2.6线性关系的考察分别精密吸取上述两种对照品溶液各2，4，6，8，10，12μl注入液相色谱仪，测定（n=2），记录色谱峰面积的积分值，以峰面积值（A）对进样量（C）进行回归，得回归方程为：大黄素：A=41856C-17151（r=0.9999）；大黄酚：A=120440C-104717（r=0.9998）。试验结果表明，大黄素对照品进样量在0.096~0.576μg范围内呈良好的线性关系；大黄酚对照品进样量