高效液相色谱法测定大黄中的大黄素、大黄酚的含量论文

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1、高效液相色谱法测定大黄中的大黄素、大黄酚的含量论文【关键词】高效摘要：采用高效液相色谱法中的梯度洗脱测定大黄中的大黄素、大黄酚的含量。结果显示，所测得的二组分的含量和相对标准偏差分别为0.1189%、2.3%；0.4213、3.1%，提示该法操作简单，结果可靠，与药典法没有显著性差异。关键词：高效液相色谱法；梯度洗脱；大黄素；大黄酚大黄是我国临床常用的中药之一，素有“将军”之称，在中药复方中应用相当广泛，有“泻热通畅、凉血解毒、逐瘀通经、攻积导滞、利胆退黄”之功效.freel×50mm.5μm；预柱:C18(4.

2、6×50mm)5μm)（大连依利特公司）。12试剂大黄素、大黄酚对照品购自中国药品生物制品检定所；大黄生药材为市售（产地为甘肃、四川）；乙腈为色谱纯，其余为分析纯。2方法与结果21色谱条件0.04MNH4OAC水溶液（PH=2.8）：乙腈=A:B；梯度洗脱：0分钟A:B=71:29，12分钟A:B=21:79，14分钟A:B=21:79，15分钟A:B=71:29。检测器：紫外检测器；波长：436nm；流速：1.0ml/min；进样体积：10μl；柱温箱温度：25℃。22标准曲线的绘制精密称取大黄素、大黄酚对照品

3、各0.0020g分别置于10ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即为大黄酚和大黄素的标准贮备液，浓度为2mg/ml。以标准贮备液为基础，以甲醇为溶剂准确配制浓度为0.05、0.1、0.15、0.2、0.25mg/ml系列浓度。精取10μl注入液相色谱仪中以对照品峰面积为纵坐标，对照品进样量为横坐标绘制标准曲线，其回归方程为：C大黄素=7.0632×10-7A＋0.00094，r=0.9997，C大黄酚=10.672×10-7A＋0.00156，r=0.9998。在本研究色谱条件下，当信噪比为3时测得大黄素和

4、大黄酚的最低检出浓度为0.15μg/ml和0.23μg/ml。23精密度试验取样品测定项下配制的供试品溶液在一日内不同时间0、2、4、8、12小时内进行HPLC分析测得日内精密度和连续7日内进行HPLC分析测得日间精密度。结果大黄素和大黄酚在日内RSD分别为2.3%和2.5%；日间RSD分别为2.5%和1.9%。见表1、2。表1日内精密度（略）24加样回收率试验取已知含量的大黄生药材0.5g，分别加入对照品溶液适量，按样品测定方法进行测定。连续测得5次测得平均回收率分别为大黄素98.1%(RSD2.9%)、大黄酚

5、100.7%(RSD2.5%)，结果见表3、4。表3大黄素加样回收率结果（略）表4大黄酚加样回收率结果（略）3样品的测定将样品研成细粉，准确称取0.5g左右，置碘量瓶中加入甲醇30ml，超声提取30分钟，提取物过滤，溶剂减压蒸干，残渣用5ml甲醇溶解，经微孔滤膜过滤后取10μl注入HPLC中，带入回归方程，用外标法测定含量。同时，按药典（2000版）附录IXH水分测定法测定含水量。将样品按样品测定项下规定进行测定，同时按药典法（2000年版药典一部第18页）进行测定，结果见表5。表5HPLC法与药典法测定结果（略

6、）4讨论41药材含量测定中提取剂的确定在样品的预处理过程中，采用正交设计法对甲醇、乙醇等溶剂进行考察，确定单组分甲醇为提取剂，同时对提取的时间和方法进行考察，确定为超声波提取30分钟。42HPLC法中检测波长的确定本研究考察了大黄素和大黄酚的紫外图谱发现在436nm处用梯度洗脱法分离样品，样品的分离度和检测限均比较好，因此检测波长定为436nm。43HPLC法中线形范围的确定本法的线形范围是0.5μg~2.5μg，这个线形范围是参考了大量的文献和本法的最低检测限确定的。大黄素和大黄酚属弱酸性成分，流动相呈弱酸性条

7、件下其保留行为得到改善，本研究考察了以0.04MNH4OAC(pH=2.8)和乙腈为流动相,分离得到的峰形对称,分离效果良好。实验结果表明，本法结果可靠，与药典法没有显著性差异，其最大的优点是操作简单准确。