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1、血小板第4因子对急性放射损伤小鼠骨髓基质细胞的保护作用论文高瑛，杨岚，田琼，方恒虎，聂蕾，刘水冰，卫张蕊【关键词】骨髓基质细胞Protectiveeffectsofplateletfactor4onbonemarroalcellsofacuteradiationinjuryinmice【Abstract】AIM:Toinvestigatetheprotectiveeffectsofplateletfactor4(PF4)onbonemarroalcells(BMSCs)ofradiatedmiceandtostudythepr
2、otectivemechanismofhematopoieticradiationinjuryinmice.METHODS:Fortymalemiceizedtofourgroups(R,R+P,N+PandN)andticearroalcells(BMSCs)culturedinvitroafterradiationmunohistochemistry.RESULTS:The24thhouradhesionrateofBMSCinradiatedmicerespectivelyreached37%,58%,74%and79.
3、3%.ThecellpercentageofG0+G1phaseincreasedandthoseofG2+MdecreasedinRgroup,paredarkablyparedtheinhibitionoftheexpressionofp27kip1.【Keyarroalcells;plateletfactor4;radiationinjuries;radiatiorprotection;p27【摘要】目的：探讨血小板第4因子(plateletfactor4,PF4)对小鼠5.0Gyγ射线全身照射后骨髓基质细胞（bonem
4、arroalcell,BMSC）的保护作用，进一步探讨PF4对造血的辐射防护机制.方法：40只雄性小鼠随机分为4组：①单纯放射组（R）.freelarroalcell,BMSC)是造血诱导微环境(hematopoieticinductivemicroenvironment,HIM)的重要组成成分.血小板第4因子(PF4)能可逆地抑制造血干细胞、祖细胞的生长，又是骨髓细胞调节的负调节因子,并因此而保护骨髓造血干祖细胞免受辐射和细胞毒剂的损伤［1，2］.在本实验中我们首次以体外培养放射损伤小鼠的BMSC为基础，观察PF4对其的保护
5、作用，进一步探讨PF4对放射损伤的保护机制.1材料和方法1.1材料BABL/c健康雄性小鼠40只，体质量22~24g，第四军医大学实验动物中心提供；RPMI1640培养基（Gibco）；PF4（Sigma）：用双蒸水稀释成工作液,置4℃冰箱保存备用,稀释浓度为100mg/L；特级小牛血清、马血清（杭州，四季青）；胰酶（Sigma）；P27kip1,SP试剂盒及DAB显色试剂盒（武汉博士德）.1.2方法60Coγ射线一次全身均匀照射,吸收剂量为5.0Gy,吸收剂量率为221.09cGy/min，距离100cm.实验随机分4组，每
6、组10只小鼠：①单纯放射组（单放组，R）：5.0Gy60Coγ射线全身照射；②放射＋PF4组（R+P）：放射前26和20h给予PF4ip，50μg/kg，照射方式和剂量同①组；③正常＋PF4组（N＋P）：PF4注射时间及剂量同②组，但不照射；④正常对照组（N）：不照射及PF4注射.BMSC原代培养参照Dexter方法［3］：BABL/c小鼠颈椎脱位处死,在无菌条件下分离双侧股骨,冲洗骨髓腔,制成单细胞悬液.RPMI1640培养体系中含100mL/L新生牛血清，150mL/L马血清，青、链霉素100kU/L,1μmol/L氢化考
7、的松,50mL/LCO2饱和湿度,37℃条件下扩增BMSC.第1次3d后半量换液，以后每隔5d半量换液.在倒置显微镜下观察细胞生长状态及细胞形态.取25mL的培养瓶，各组6个，接种细胞5×105/瓶，每4h取1瓶，倒去培养液，2.5g/L胰酶消化，计数贴壁细胞，计算每个时间点的贴壁率（贴壁率＝已贴壁细胞数/接种细胞数×100%）.将各组BMSC用2.5g/L胰酶消化后生理盐水制成单细胞悬液，700mL/L乙醇固定,溴化丙啶染色,用流式细胞仪分析细胞周期和DNA含量.另p27kip1表达的免疫组化染色（SP法）：BMSC2×10
8、9/L接种于孔底预先铺好1cm2经过酸处理过的细胞玻璃爬片的24孔板，经完全培养基培养10d后取出玻片，950mL/L乙醇固定，严格按照说明书操作.行HE染色对照.用PBS替代一抗作为阴性对照.统计学处理：实验结果均以x±s表示，使用SPSS10.0软件，均数间差别用单因素方
