血小板第4因子对急性放射损伤小鼠骨髓基质细胞

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1、血小板第4因子对急性放射损伤小鼠骨髓基质细胞：高瑛，杨岚，田琼，方恒虎，聂蕾，刘水冰，卫张蕊【关键词】骨髓基质细胞Protectiveeffectsofplateletfactor4onbonemarroalcellsofacuteradiationinjuryinmice　　【Abstract】AIM:Toinvestigatetheprotectiveeffectsofplateletfactor4(PF4)onbonemarroalcells(BMSCs)ofradiatedmiceandtostudytheprotecti

2、vemechanismofhematopoieticradiationinjuryinmice.METHODS:Fortymalemiceizedtofourgroups(R,RP,NPandN)andticearroalcells(BMSCs)culturedinvitroafterradiationmunohistochemistry.RESULTS:The24thhouradhesionrateofBMSCinradiatedmicerespectivelyreached37%,58%,74%and79.3%.Thecell

3、percentageofG0G1phaseincreasedandthoseofG2MdecreasedinRgroup,paredarkablyparedtheinhibitionoftheexpressionofp27kip1.　　【Keyarroalcells;plateletfactor4;radiationinjuries;radiatiorprotection;p27　　【摘要】目的：探讨血小板第4因子(plateletfactor4,PF4)对小鼠5.0Gyγ射线全身照射后骨髓基质细胞（bonemarroalcell

4、,BMSC）的保护作用，进一步探讨PF4对造血的辐射防护机制.方法：40只雄性小鼠随机分为4组：①单纯放射组（R），②放射＋PF4组（RP），③正常＋PF4组（NP），④正常对照组（N）.小鼠照射前分别于26和20hipPF4，每次剂量50μg/kg.于照射后3d取BMSC体外培养，倒置显微镜下观察贴壁细胞生长状况，并于培养10d后用流式细胞仪测定贴壁细胞的细胞周期和DNA含量，免疫组化（SP法）检测细胞p27kip1表达.结果：放射损伤小鼠BMSC24h贴壁率4组依次为37％,58%,74%,79.3%；流式细胞仪检测结果表明R

5、组G0G1期细胞显著高于其余3组，而G2M期细胞显著低于其余三组，DNA含量显著低于其余3组；R组p27kip1表达明显强于其余3组.结论：PF4对放射损伤的BMSC有保护作用，可能与抑制p27kip1表达有关.（larroalcell,BMSC)是造血诱导微环境(hematopoieticinductivemicroenvironment,HIM)的重要组成成分.血小板第4因子(PF4)能可逆地抑制造血干细胞、祖细胞的生长，又是骨髓细胞调节的负调节因子,并因此而保护骨髓造血干祖细胞免受辐射和细胞毒剂的损伤［1，2］.在本实验中我

6、们首次以体外培养放射损伤小鼠的BMSC为基础，观察PF4对其的保护作用，进一步探讨PF4对放射损伤的保护机制.　　1材料和方法　　1.1材料　　BABL/c健康雄性小鼠40只，体质量22~24g，第四军医大学实验动物中心提供；RPMI1640培养基（Gibco）；PF4（Sigma）：用双蒸水稀释成工作液,置4℃冰箱保存备用,稀释浓度为100mg/L；特级小牛血清、马血清（杭州，四季青）；胰酶（Sigma）；P27kip1,SP试剂盒及DAB显色试剂盒（武汉博士德）.　　1.2方法　　60Coγ射线一次全身均匀照射,吸收剂量为5.

7、0Gy,吸收剂量率为221.09cGy/min，距离100cm.实验随机分4组，每组10只小鼠：①单纯放射组（单放组，R）：5.0Gy60Coγ射线全身照射；②放射＋PF4组（RP）：放射前26和20h给予PF4ip，50μg/kg，照射方式和剂量同①组；③正常＋PF4组（N＋P）：PF4注射时间及剂量同②组，但不照射；④正常对照组（N）：不照射及PF4注射.BMSC原代培养参照Dexter方法［3］：BAB