骨髓基质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后bdnf与ga

《骨髓基质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后bdnf与ga》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、骨髓基质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后BDNF与GA【摘要】[目的]研究骨髓基质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)移植对大鼠脊髓损伤(SCI)后生长相关蛋白43(GAP43)及脑源性神经营养因子(BDNF)基因表达的影响，探讨骨髓基质干细胞移植修复大鼠脊髓损伤的机制。[方法]大鼠SCI后第7d移植MSCs，应用RTPCR法观察MSCs移植后，大鼠脊髓损伤区GAP43和BDNF基因表达的变化。[结果]MSCs移植组较单纯损伤组明显增强了GAP43mRNA、BDNFmRNA的表达。[结论]MSCs移植后改变脊髓损伤区的微环境，上调BDNFmRN

2、A，促进GAP43mRNA的表达，是修复脊髓损伤的机制之一。【关键词】脊髓损伤;细胞移植;生长相关蛋白43;脑源性神经营养因子　　Abstract：[Objective]Toobservetheeffectsofmesenchymalstemcells(MSCs)transplantationonthebrainderivedneurotrophicfactor(BDNF)andgroechanismofrepairingtheSCIbyMSCstransplantation.[Method]SevendaysaftertheoperationofSCI,theMS

3、Cseansofabove,themechanismofrepairingtheSCIafterthecelltransplantationRNAandGAP43mRNAinthespinalcordofgroupA,improvedtheneuronregeneration.[Conclusion]ThetransplantationofMSCscanrepairtheinjuriedsiteandpromotetheregenerationofaxonbyenhancedtheexpressionofBDNFmRNAandGAP43mRNA.Itisoneoft

4、hemechanismofrepairingtheSCIbyMSCstransplantation.　　Keyesenchymalstemcells，MSCs)在一定条件下可诱导分化为神经细胞，星形胶质细胞等，MSCs被移植到中枢神经系统后，能进一步迁移、分化，与宿主神经元整合，形成髓鞘并发挥作用等特点受到国内外学者的关注。MSCs移植可以通过多种机制修复SCI，笔者旨在观察MSCs移植对大鼠SCI后生长相关蛋白(groodifiedEaglemedium)/F12(1∶1)培养基、胰蛋白酶、胎牛血清(购自美国Gibco公司)、B27;抗巢蛋白(Nestin)抗体、SA

5、BC试剂盒(购自武汉博士德生物公司);mRNA提取试剂盒、PCR反应试剂盒(购自大连宝生生物公司)。　　1.2骨髓基质干细胞的分离、培养与鉴定　　无菌条件下分离大鼠股骨、胫骨，剪去两端骨骺，显露骨髓腔，用DHanks注射器反复冲洗骨髓腔，收集骨髓细胞悬浮液，接种在塑料培养瓶中，37℃，5%CO2培养，第3d半量换液，以后每隔3d全量换液，11～14d细胞接近融合时，弃培养液，PBS轻洗3次，加入0.125%胰酶(含0.01%EDTA)消化2min，用含10%FBS的LDMEM培养液终止消化，吸管轻轻吹打细胞，收集细胞悬液，1000r/min离心3min，弃上清，用含10

6、%FBS的LDMEM培养液悬浮细胞，按1∶3接种传代，移植前浓缩为1×107/μl作为移植细胞。　　BMSCs的免疫组化鉴定：BMSCs缺乏特征性的标记，表达了间质细胞、内皮细胞和表皮细胞的表面标记，CD29、CD44、CD105、CD166是MSC的重要标记物。目前认为它不表达造血谱系标志物CD11、CD45、CD34、CD14，本实验选用CD34和CD44进行免疫组化鉴定的目的在于排除干细胞中造血干细胞。　　1.3脊髓损伤动物模型制作　　SCs移植组，36只)以微量注射器缓慢注入含MSCs(约为5×104/μl)的培养液5μl，B组(DMEM填充组，36只)，C组未

7、制作脊髓损伤(对照组，28只)。移植术后一周内每日腹腔注射抗生素。　　1.4RTPCR法检测GAP43mRNA与BDNFmRNA的表达变化　　分别于移植术后1、3、5d麻醉处死大鼠，A组与B组取出损伤节段的脊髓(8只/时点)，C组于同一节段取出相应脊髓(2只/时点)。首先抽提总mRNA，以逆转录法(RT法)先合成cDNA,再进行PCR扩增;引物序列分别为：GAP43F5′GCAGGACGAGGGTAAAGA3′，R5′CACGCACCAGATCAAATAA3′;预扩增产物长为374bp。BDNFF5'AGAAGAGGAGG