血小板因子4对环磷酰胺诱导化学损伤小鼠骨髓细胞的保护作用

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1、血小板因子4对环磷酰胺诱导化学损伤小鼠骨髓细胞的保护作用关键词:血小板因子;环磷酰胺;造血干细胞摘要:目的探讨血小板因子4（PF4）对环磷酰胺（CTX）诱导化学损伤小鼠骨髓的保护作用及机制.方法环磷酰胺200mg・kg-1，腹腔一次性注射，造成药物损伤模型.给CTX前给予PF4预处理，给药后动态观察小鼠外周血白细胞数的变化，并于第5和第8日，分别用流式细胞仪（FCM）测定骨髓有核细胞DNA的含量及细胞周期变化.结果注射CTX后4d，外周血白细胞降至最低点，然后逐渐回升，但PF4处理组与单独CTX处理组比较无差异（P>0.05）.第5日PF4处理组的骨髓有核细胞中

2、，G0/G1期细胞的百分率较CTX组明显提高，细胞的坏死、凋亡率下降（P<0.01），而与PBS对照组基本相同（P>0.05）.第8日PF4处理组的骨髓有核细胞数较单独CTX处理组增加明显（P<0.01）.结论PF4对CTX损伤的小鼠骨髓细胞有保护作用，可作为肿瘤患者使用烷化剂化疗时的骨髓防护剂.　　Keyide;hematopoieticstemcellAbstract:AIMToprovideevidenceforstudyingthechemo-protectiveeffectofPF4anditsmachanismonmurinehematopoietic

3、cellstreatediceg・kg-1）tomakethemodelsofchemicallesions.Thenthenumbersoftheirperipheral）.RESULTSThereentgroupsandtheoneofCTXgroups（P>0.05）.Onday5，bonemarroentgroupsent，bonemarroentgroupsurinebonemarrothecytotoxiceffectsofCTX.PF4shouldbeapotentprotectiveagentduringchemotherapy.　　0引言　　骨

4、髓造血系统是对化疗非常敏感的组织，在造血系统恶性肿瘤的治疗过程中，常因骨髓造血抑制而限制化疗药物的剂量，直接影响肿瘤的治疗效果.环磷酰胺（CTX）是肿瘤化疗中最常用的烷化剂，但其对正常骨髓细胞也有很强的抑制作用.此外，作为免疫抑制剂的化疗药物，CTX还是干细胞移植前预处理最常用的药物之一.已有研究表明，血小板因子4（PF4）对5-FU处理的小鼠骨髓有明显的保护作用［1］.但Han等［2］体外实验证明，PF4对HL-60，HEL，SMMC7721及MKN-45等肿瘤细胞株无保护作用.PF4的保护作用与其能可逆性抑制造血干/祖细胞的增殖有关［3］，但对烷化剂CTX的作用至今尚未见报道.

5、为进一步探讨PF4对CTX诱导的损伤小鼠骨髓造血干细胞的影响，我们建立了CTX诱导小鼠骨髓损伤的实验动物模型.通过流式细胞仪测定细胞周期的变化，探讨了PF4对造血干细胞的化疗保护作用的机制.　　1材料和方法　　1.1材料动物:一级BALB/c小鼠36只，雄性，体质量18～20g，鼠龄10～12a公司，系500μg甘氨酸缓冲液冻干品，用5mL三蒸水稀释成工作液，4℃冰箱备用，稀释浓度为100mg・L-1.CTX由江苏恒瑞医药股份有限公司生产，批号01111221，200mg/支，溶于10mL生理盐水中，稀释浓度为20g・L-1.　　1.2方法　　1.2.1

6、分组将36只小鼠随机分为3组，即PF4处理组、单独CTX处理组和PBS对照组，每组12只.PF4处理组:小鼠一次性ipCTX，剂量为200mg・kg-1，用CTX前26h和20h各ipPF4，剂量为40μg・kg-1.单独CTX处理组:CTX用法同上，给CTX前ip等体积的PBS缓冲液.PBS对照组:按上述方法注射等体积的PBS.各组分别于给CTX前及给CTX后2，4，5，6和8d取尾静脉血进行白细胞计数.　　1.2.2制备骨髓有核细胞悬液给予CTX后第5日及第8日每组小鼠各取6只，以颈椎脱臼法处死.取出股骨，剔除肌肉和结缔组织，剪开股骨两头，用6号针头

7、以RPMI1640液冲出骨髓细胞，再用4号针头过滤制成单个骨髓细胞悬液，检测骨髓有核细胞（bonemarroin-1，5min），弃上清，用PBS洗涤2次，再加入1mLPBS重悬成单细胞悬液，加入2mL无水乙醇，立即混匀，用封口膜封口，放置4℃冰箱冷藏备用.每份样品的细胞数约为（5～10）×105个.　　1.2.4细胞周期分析取上述样品，用PBS洗2次，以洗去残留的无水乙醇，加100μLPBS后混匀，用碘化丙锭染色后，以流式细胞仪分析细胞周期及DNA含量的变化.以上实