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1、肾缺血预处理对兔未成熟心肌Bcl论文孙忠东，高尚志，池一凡，夏家红，杨辰垣【关键词】缺血预处理EffectsofrenalischemicpreconditioningontheexpressionsofBcl2,Bax,Fasproteinsinimmaturemyocardialcellsinrabbits【Abstract】AIM:Toinvestigatetheeffectsofrenalischemicpreconditioning(RIP)onapoptosisandexpressionsofBcl2,BaxandFasproteinsinimmaturemyocardial
2、cellsinrabbits.METHODS:Isolatedodelmaturerabbitslydividedintocontrolgroup,ischemia/reperfusion(I/R)groupandRIPgroup.TheTUNEL,nucleosomalladderofDNAfragmentsandtheexpressionofBcl2,BaxandFasproteinsentsmaturemyocardialcellapoptosisandaffectstheexpressionsofBcl2,BaxandFasproteins.【Keyicpreconditioni
3、ng;apoptosis;Bcl2;Bax;Fas【摘要】目的：探讨肾缺血预处理(RIP)对兔未成熟心肌细胞凋亡和Bcl2,Bax,Fas蛋白表达的影响.方法：24只幼兔采用Langendorff离体心脏灌注模型，随机分为正常对照组（C）、心脏缺血/再灌注组(I/R)和肾缺血预处理组(RIP)，每组8只，测定各组未成熟心肌细胞凋亡和Bcl2,Bax,Fas蛋白表达.结果：RIP组与I/R组比较.freelicpreconditioning,RIP)对未成熟心肌细胞凋亡是否有影响的报道甚少.本实验目的是观察RIP对兔未成熟心肌细胞凋亡和Bcl2,Bax,Fas等基因蛋白表达的影响.1材料和
4、方法1.1材料出生14～21d的健康长耳大白兔24只(华中科技大学同济医学院动物室提供)，雌雄不拘.MPIAS1000型多媒体病理图像分析系统（华中科技大学同济医学院清平影像工程公司生产）进行光密度测定.细胞凋亡试剂盒购自南京建成生物技术有限公司.1.2方法1.2.1模型建立及分组按处理方式不同将动物随机分为3组,每组8只.开胸，右心耳注入肝素(300U/kg)，切开主动脉插入灌注管，即行KH液Langendorff灌流，灌注压为6kPa(45.0mmHg).切取心脏，结扎肺静脉，剪开左心耳将内径3mm左房灌注管插入左房，内径1mm测压管插入左心室.左房灌注压为1kPa(7.5mmHg)
5、，左心后负荷为3.0kPa(22.5mmHg).KH缓冲液成分(mmol/L):NaCl118.50,KCl4.70,CaCl22.50,MgSO41.20,NaHCO325.00,KH2PO41.20,Glucose11.10,Na2EDTA0.50.使用时新鲜配制，经0.45μm滤器过滤，灌流前给予体积分数为950mL/LO2和50mL/LCO2混合气体按1.5L/min向储液瓶内的灌流液中通气30min，灌流液维持在37℃，pH为7.4，渗透压为824~850kPa/L［320~330mosm/L,1mosm=2.5787kPa(37℃)］.①正常对照组（C）:仅灌注KH液180m
6、in，然后取心肌标本.②缺血/再灌注组(I/R)：灌注20min后，停灌45min，复灌120min.③肾缺血预处理组(RIP)：反复2次阻断肾血流5min/放开5min，建立Langendorff模型，然后重复I/R组缺血/再灌注方法.1.2.2观察指标①凋亡细胞原位标记与半定量分析：左心室心肌组织常规石蜡包埋，采用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT酶)介导带荧光的deuridinetriphosphate(dUTP)缺口末端标记法(terminaltransferaseUTPnickendlabeling,TUNEL)［1］，标记凋亡细胞核中DNA3′OH末端，经脱蜡，洗脱，消化，孵育，洗
7、脱，二氨基联苯胺(DAB)显色，镜下观察.根据凋亡阳性细胞分布情况，每张切片拍摄5个阳性视野，每视野计数300个心肌细胞中阳性细胞数，以平均计算阳性细胞所占的百分比作为凋亡细胞阳性指数(AI).②琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段梯：采用快速法检测DNA片段梯［2］.③Bcl2,Bax,Fas基因蛋白的表达：采用PIAS1000型多媒体彩色病理图像分析系统进行定量测定A值.统计学处理：数据以x±s表示，采用t检验，P0.05为差异有统计学
