七氟醚预处理对缺血- 再灌注心肌组织bcl2表达的影响论文

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1、七氟醚预处理对缺血/再灌注心肌组织Bcl2表达的影响论文【摘要】目的：探讨七氟醚预处理对缺血/再灌注心肌组织保护作用的机制。方法：制备心肌缺血/再灌注损伤模型,将24只新西兰白兔随机分成对照组、缺血预处理组、七氟醚预处理组。实验完毕后，将各组动物心肌组织做组织切片,采用免疫组织化学方法观察各组动物心肌细胞内Bcl2水平的表达,利用HPIAS2000图像分析系统测定Bcl2在以上3组中表达的平均光密度和平均阳性面积率。结果:Bcl2在缺血预处理组和七氟醚预处理组心肌细胞内的表达高于对照组,差异有显著性(P0.05);缺血预处理组心肌细胞内

2、Bcl2表达水平与七氟醚预处理组相比，差异无显著性(P＞0.05)。结论：七氟醚预处理对缺血再灌注的在体兔心肌具有重要的保护作用。【关键词】七氟醚;预处理;再灌注损伤;心肌七氟醚是一种较新的吸入麻醉药,诱导迅速、刺激性小、溶解度低,并且吸收和清除迅速。近年来,有研究报道吸入麻醉药安氟醚、氟烷、异氟醚、七氟醚、地氟醚除了具有优良的麻醉作用外,还具有较好的心肌保护作用［1～3］，并且在动物实验中发现氟烷、安氟醚、异氟醚、地氟醚能模拟心肌预处理效应,减轻心肌缺血/再灌注损伤［4］,但尚未见有关七氟醚预处理对缺血/再灌注心肌组织Bcl2表达的影响。我

3、们采用免疫组织化学方法检测了七氟醚预处理对缺血/再灌注心肌组织Bcl2表达的影响,进一步探讨七氟醚预处理对心肌缺血/再灌注损伤的影响及其可能的机制。1材料与方法1.1模型制备选用健康新西兰白兔(3～3.5kg)24只,雌雄不限,.freelg·kg-1。颈部正中分离气管并切开插管,用DH2140动物呼吸机进行100%纯氧机械通气,控制呼气末二氧化碳分压在4～4.5kPa之间。分离颈外静脉置20号管,持续滴注乳酸林格氏液20ml·kg-1·h-1,必要时加少量碳酸氢钠以维持血液pH值在7.35～7.45之间。麻醉维持用微量泵泵注咪唑安定0.05～

4、0.1mg·kg-1·h-1,氯胺酮2～5mg·kg-1·h-1和维库溴胺0.05～0.1mg·kg-1·h-1。分离颈动脉,置22号管连接换能器测压。正中劈开胸骨,切开心包,缝线绕过左冠状动脉前降支近端深面并用胶管将其套住。拉紧套管即阻断冠状动脉,表现为心肌局部青紫,心电图ST段上升。放松套管,局部反应性充血,表明心肌再灌注。通过左心耳穿刺置入20号管至左心室,并连接换能器测压。1.2实验分组完成上述手术步骤后稳定30min,将白兔随机分成对照组、缺血预处理组、七氟醚预处理组,每组8只。对照组在45min后阻断冠脉3h,随后再灌3h。缺血预处理

5、组先行3次每次5min的冠脉阻断,每两次之间再灌5min,预处理后稳定20min,然后阻断3h,再灌3h。七氟醚组用麻醉机(ohmeda)吸入2%七氟醚30min后,洗脱15min,然后阻断冠脉3h,再灌3h。其余步骤同对照组。加用吸入麻醉药的组在吸入麻醉药期间停用静脉麻醉药,以维持麻醉水平相对稳定。呼出气中二氧化碳和麻醉药浓度用麻醉气体监测仪(RGM5250,England)监测。以上各组动物实验完毕后,将各组动物从心底部剪取心脏,切下心室,进行标本制备。1.3主要试剂和仪器1.3.1主要试剂即用型SP通用型免疫组织化学试剂盒，DAB显色试剂

6、盒及多聚赖氨酸（北京中山生物技术有限公司）；浓缩型鼠抗兔Bcl2单克隆抗体（美国SantaCruz公司）。1.3.2主要仪器Y21)显著减少(P=0.019),过氧化氢酶表达显著增加(P=0.001),提示七氟醚预处理可能对冠脉搭桥术后的患者有心肌保护作用,可能与一些前蛋白和抗保护蛋白表达的改变有关。另一项关于微创冠脉旁路移植术(MIDCAB)中对照使用七氟醚和异丙酚的研究［7～10］也指出,对于冠状动脉缺血的病人,不论接受心脏或非心脏手术,七氟醚可能对心肌都有保护作用。本研究结果表明：缺血预处理组心肌细胞Bcl2表达呈阳性；七氟醚预处理组心

7、肌细胞Bcl2表达呈强阳性；对照组心肌细胞Bcl2表达弱。经q检验，缺血预处理组、七氟醚预处理组与对照组之间，Bcl2的平均光密度及阳性面积率有显著性差异（P＜0.01），缺血预处理组与七氟醚预处理组之间平均光密度及阳性面积率的差异无显著性（P＞0.05）。结合这一结果，我们认为七氟醚预处理对缺血再灌注的心肌细胞的凋亡具有抑制作用，同时可促进心肌细胞的存活而达到对心肌细胞的保护作用。七氟醚预处理的机制目前尚不清楚,可能与激活腺苷受体、抑制蛋白激酶C、开放胞浆和线粒体ATP调节钾离子通道(KATP)、通过选择性的直接作用于凋亡蛋白合成、减少兴

8、奋性神经递质尤其是兴奋性氨基酸的释放、减少铁离子摄取及稳定线粒体膜电位、诱导即早基因(immediateearlygenes,IEGs