七氟醚预处理对缺血-再灌注心肌组织bcl2表达的影响

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1、七氟醚预处理对缺血/再灌注心肌组织Bcl2表达的影响【关键词】七氟醚;预处理;再灌注损伤;心肌　　七氟醚是一种较新的吸入麻醉药,诱导迅速、刺激性小、溶解度低,并且吸收和清除迅速。近年来,有研究报道吸入麻醉药安氟醚、氟烷、异氟醚、七氟醚、地氟醚除了具有优良的麻醉作用外,还具有较好的心肌保护作用［1～3］，并且在动物实验中发现氟烷、安氟醚、异氟醚、地氟醚能模拟心肌预处理效应,减轻心肌缺血/再灌注损伤［4］,但尚未见有关七氟醚预处理对缺血/再灌注心肌组织Bcl2表达的影响。我们采用免疫组织化学方法检测了

2、七氟醚预处理对缺血/再灌注心肌组织Bcl2表达的影响,进一步探讨七氟醚预处理对心肌缺血/再灌注损伤的影响及其可能的机制。　　1材料与方法　　1.1模型制备　　选用健康新西兰白兔(3～3.5kg)24只,雌雄不限,肌注氯胺酮70mg·kg-1。颈部正中分离气管并切开插管,用DH2140动物呼吸机进行100%纯氧机械通气,控制呼气末二氧化碳分压在4～4.5kPa之间。分离颈外静脉置20号管,持续滴注乳酸林格氏液20ml·kg-1·h-1,必要时加少量碳酸氢钠以维持血液pH值在7.35～7.45之间。麻醉

3、维持用微量泵泵注咪唑安定0.05～0.1mg·kg-1·h-1,氯胺酮2～5mg·kg-1·h-1和维库溴胺0.05～0.1mg·kg-1·h-1。分离颈动脉,置22号管连接换能器测压。正中劈开胸骨,切开心包,缝线绕过左冠状动脉前降支近端深面并用胶管将其套住。拉紧套管即阻断冠状动脉,表现为心肌局部青紫,心电图ST段上升。放松套管,局部反应性充血,表明心肌再灌注。通过左心耳穿刺置入20号管至左心室,并连接换能器测压。　　1.2实验分组　　完成上述手术步骤后稳定30min,将白兔随机分成对照组、缺血预处理

4、组、七氟醚预处理组,每组8只。对照组在45min后阻断冠脉3h,随后再灌3h。缺血预处理组先行3次每次5min的冠脉阻断,每两次之间再灌5min,预处理后稳定20min,然后阻断3h,再灌3h。七氟醚组用麻醉机(ohmeda)吸入2%七氟醚30min后,洗脱15min,然后阻断冠脉3h,再灌3h。其余步骤同对照组。加用吸入麻醉药的组在吸入麻醉药期间停用静脉麻醉药,以维持麻醉水平相对稳定。呼出气中二氧化碳和麻醉药浓度用麻醉气体监测仪(RGM5250,England)监测。以上各组动物实验完毕后,将各组动

5、物从心底部剪取心脏,切下心室,进行标本制备。　　1.3主要试剂和仪器　　1.3.1主要试剂即用型SP通用型免疫组织化学试剂盒，DAB显色试剂盒及多聚赖氨酸（北京中山生物技术有限公司）；浓缩型鼠抗兔Bcl2单克隆抗体（美国SantaCruz公司）。　　1.3.2主要仪器Y组织切片常规脱蜡至水，3%过氧化氢处理10min以抑制内源性过氧化物酶活性，Bcl2采用微波修复抗原，正常羊血清处理10min以减少非特异性背景，一抗4℃孵育过夜，生物素标记的二抗处理10min，链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶复合物

6、处理10min，DAB显色液显色，自来水冲洗终止反应，苏木精复染，脱水、透明、封片。用PBS代替一抗作为阴性对照组，已知阳性组织作为阳性对照。　　1.5免疫组织化学结果判断　　Bcl2以胞膜或胞浆出现棕黄色颗粒为阳性反应。阴性对照组除细胞核染成蓝色外，胞核和胞浆内无棕黄色反应物。　　采用HPIAS2000高清晰度彩色病理图文报告管理系统对Bcl2抗原的表达进行定量分析，每张切片随机选取5个高倍镜视野(×400)，测定每个视野下阳性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积，计算阳性面积率。以

7、每例5个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测量值。　　1.6统计学处理　　对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNKq检验，检验水准α为0.05。　　2结果　　缺血预处理组心肌细胞胞浆内可见较多棕黄色颗粒,Bcl2表达呈阳性；七氟醚预处理组心肌细胞胞浆内可见密集分布的棕黄色颗粒,Bcl2表达呈强阳性；对照组心肌细胞胞浆内可见少量的棕黄色颗粒,Bcl2表达弱。图像分析结果显示：缺血预处理组Bcl2表达的平均光密度为0.3529，七氟醚预处理组Bc

8、l2表达的平均光密度为0.3834，对照组Bcl2表达的平均光密度为0.1863。缺血预处理组Bcl2表达的阳性面积率为0.2547，七氟醚预处理组Bcl2表达的阳性面积率为0.2735，对照组Bcl2表达的阳性面积率为0.0869。经单因素方差分析，组间有显著性差异（P＜0.01）。经q检验，缺血预处理组、七氟醚预处理组与对照组之间，Bcl2的平均光密度及阳性面积率有显著性差异（P＜0.01），缺血预处理组与七氟醚预处理组之间平均光密度及阳