受损背根节神经元持续性钠流的检测论文

《受损背根节神经元持续性钠流的检测论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、受损背根节神经元持续性钠流的检测论文刘志洋，王玉英，王文挺,胡三觉【关键词】持续性钠流【Abstract】AIM:TodetectpersistentsodiumcurrentandtostudyitsrelationshipembranepotentialoscillationininjuredDRGneurons.METHODS:PO),theoscillationdisappeared.CONCLUSION:TheINapdetectedintheinjuredDRGneuronsmaybeinsomeptechniques;persistentsodiumcur

2、rent；subthresholdmembranepotentialoscillation【摘要】目的：检测损伤大鼠背根节（DRG）神经元持续性钠流（persistentsodiumcurrent，INap）并研究其与阈下膜电位振荡的关系.方法：术后3～6d慢性痛大鼠模型背根节急性分离，消化离散成单细胞，对中小型DRG神经元运用全细胞膜片钳技术记录.结果：电压钳下，钳制电位在-80mV，给予斜波去极化到-30mV时.freels,幅值89～200pA的持续性内向钠流，且对100nmol/LTTX敏感.电流钳下，产生阈下膜电位振荡的细胞，给予100nmol/LTTX后，振

3、荡消失.结论：在受损DRG神经元上检测到的持续性钠流可能是产生阈下膜电位振荡的基础之一.【关键词】神经节，脊；膜片钳术；持续性钠流；阈下膜电位振荡0引言外周感觉神经损伤以后，常伴随产生异常感觉，包括痛觉过敏现象.这些异常感觉主要由外周感觉神经的异位自发放电引起［1］.背根节（dorsalrootganglia,DRG）作为外周感觉信号传向中枢的第一站，担当异位自发放电“起搏点”的作用.异位自发放电的基础是阈下膜电位振荡（subthresholdmembranepotentialoscillation,SMPO）［2］.但这种振荡的离子基础还没有明确的说法.通过本实验的研

4、究，在受损DRG神经元上，检测INap及其与SMPO产生的关系，有助于揭示异位自发放电产生的离子通道机制，为深入了解慢性痛信号产生的机制奠定基础.1材料和方法1.1材料SD大鼠10只，体质量120～150g，雌雄不拘，由第四军医大学实验动物中心提供.胰蛋白酶（Ⅰ型），胶原酶（Ⅲ型），MgATP，CsF购自Sigma公司，其他试剂为国产.Axon200A放大器（美国Axon公司）.1.2方法急性分离背根节细胞后，进行全细胞膜片钳记录.实验在30个DRG细胞上记录，其中25个中细胞和5个小细胞.中细胞静息膜电位为(-51.3±4.1)mV,小细胞为(-48.5±3.4)mV

5、.1.2.1DRG细胞的制备SD大鼠在戊巴比妥钠（40mg/kg,ip）麻醉下，制备DRG慢性压迫模型，其制备方法参见文献［3］.术后3～6d，取制备好的动物模型，再用戊巴比妥钠麻醉，迅速取出L4L5背根节，置于氧饱和的M1640液中，镜下仔细剪除多余的神经纤维后，再剪碎神经节置于含酶的M1640液2mL中（胰蛋白酶0.375g/L，胶原酶1.125g/L），37℃水浴消化30min后，加入胰酶抑制剂终止消化.置细胞于一次性培养皿中，用细胞外液灌流（1.5mL/min），其配方如下（mmol/L）：NaCl150，KCl5，MgCl21，CaCl25，Glucose10

6、，Hepes10.细胞贴壁1h后进行电生理记录.依据细胞体积，DRG细胞可分为大（直径40μm）、中（直径40～30μm）、小型（直径30μm）分别对应于Aα,Aβ,.freelV,给以斜波去极化至-30mV.电极电阻为2～4MΩ,封接阻抗达到1GΩ以上.实验在室温下进行.电极内液配方（mmol/L）:CsF140，EGTA1，NaCl10，Hepes10，细胞外液配方（mmol/L）：NaCl140，KCl3，MgCl21，CaCl21，Hepes10.1.2.3电流钳制电压钳模式下启动，先用电压钳模式完成高阻封接，后转向电流钳模式进行记录，记录内外液换成正常液体，电

7、极内液（mmol/L）：Kgluconate140，MgCl22，EGTA1.1,Hepes10，MgATP2，用KOH调pH值为7.2左右.细胞外液配方（mmol/L）:NaCl150，KCl5，MgCl21,CaCl25，glucose10，10Hepes，用NaOH调pH值为7.4左右.以上实验，封接电阻低于1GΩ的细胞或静息电位低于-40mV，记录中电位衰减明显的细胞放弃.在此过程中，始终保持漏流在100pA以内.统计学处理：采用pCLamp6.0,Origin6.0进行刺激和记录及数据获取和分析.数据均用x±sx.2结果2.1持