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1、青蒿琥酯逆转K562/A02细胞对阿霉素耐药性机理的研究论文摘要目的：研究青蒿琥酯逆转K562/A02细胞对阿霉素的耐药性及其作用机制。方法：以对阿霉素敏感的K562细胞作为对照，用MTT法观察在有或无阿霉素存在条件下青蒿琥酯对培养的K562/A02细胞干预48h后的生长抑制情况,流式细胞仪检测100μgml-1青蒿琥酯作用48h前后K562/A02细胞P糖蛋白（Pgp）平均荧光强度（MFI）的强弱,生化方法检测100μgml-1青蒿琥酯作用48h前后K562/A02细胞内谷胱甘肽（GSH）的含量。结果：(1)在不含阿霉素情况下，青蒿琥酯对K562及
2、K562/A02细胞的IC50分别为13.80μgml-1和13.62μgml-1（P＞0.05），在阿霉素存在情况下，青蒿琥酯对K562/A02细胞抑制作用明显增加（P＜0.01）；(2)与K562细胞Pgp的表达相比,K562/A02细胞Pgp高表达,青蒿琥酯处理前后K562/A02细胞的MFI无差别（P＞0.05）；(3)青蒿琥酯处理后K562/A02细胞内GSH含量较处理前明显下降（P＜0.05）。结论：青蒿琥酯对K562及K562/A02细胞具有细胞毒作用，且可逆转K562/A02细胞对阿霉素的耐药，其机制可能是通过干扰细胞内GSHGSHｓ
3、转移酶系统功能的发挥，而非对Pgp表达的影响。关键词青蒿琥酯；多药耐药；K562/A02细胞；谷胱甘肽多药耐药(multidrugresistance,MDR)是指肿瘤细胞对一种化疗药物出现耐药的同时,对其他结构不同、作用靶位不同的化疗药物亦产生抗药性.freell-1阿霉素、10%小牛血清的RPMI1640培养液,置于37℃、5%CO2培养箱中,2～3d传代1次。1.2主要药物及试剂青蒿琥酯（广西桂林制药二厂，批号010901），临用前溶于5％的NaHCO3溶液中，然后用RPMI1640培养液稀释；四氮唑蓝（MTT，Gibco公司）；二甲基亚砜（D
4、MSO，Sigma公司）；Pgp单抗(PEUIC2美国Coulter公司)；GSH测定试剂盒、考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)。1.3青蒿琥酯对K562及K562/A02细胞增殖的影响取对数生长期K562及K562/A02细胞,调细胞浓度为1.0×105ml-1。青蒿琥酯分别用含10%小牛血清的RPMI1640培养液及含2μgml-1阿霉素、10%小牛血清的RPMI1640培养液稀释,作用终浓度依次为100、50、25、12.5、6.25、3.125μgml-1。将各浓度青蒿琥酯分别与0.1ml培养细胞加入96孔平底培养板中，每组样
5、本设5个复孔。37℃、5%CO2饱和湿度下培养48h。在终止培养前4h每孔加入MTT20μl(5mgml－1),继续培养4h后离心10min,.freelin；将培养板置ELSA酶标仪在570nm波长处测每孔的光密度（OD）值并记录。计算抑制率并利用何尔恩法［1］计算半数抑制浓度（IC50）。抑制率＝（1-实验组OD／对照组OD）×100％。1．4青蒿琥酯对K562/A02细胞Pgp表达的影响无菌收集对数生长期的K562及K562/A02细胞,细胞浓度为2×106ml-1。PBS洗涤,PEUIC24℃避光反应30min,PBS洗涤后重悬,流式细胞仪检
6、测细胞Pgp平均荧光强度（MFI），设不加PEUIC2组作为自身阴性对照。K562/A02细胞经100μgml-1青蒿琥酯处理48h后无菌收集，配成浓度为2×106ml-1的细胞悬液。按上述方法测Pgp的MFI。1．5青蒿琥酯对K562/A02细胞内GSH含量的影响取对数生长期K562及K562/A02细胞,调细胞浓度为1.0×105ml-1，分为K562细胞无药组、K562/A02细胞无药组及K562/A02细胞药物（100μgml-1青蒿琥酯）处理组。培养48h后收集细胞,PBS洗涤后调整细胞数为1×106ml-1,取2ml破碎细胞,离心后留取上
7、清。实验按试剂盒说明书操作,显色反应后测定吸光度,于595nm波长处测定蛋白,412nm波长处测定GSH含量。实验重复4次。计算各实验组蛋白含量及细胞内GSH含量。1．6统计学处理数据用x-±s表示，两组间采用t检验进行显著性分析。2结果2．1青蒿琥酯对K562及K562/A02细胞增殖的影响青蒿琥酯对K562及K562/A02细胞抑制率见表１。在不含阿霉素情况下，青蒿琥酯对K562及K562/A02细胞的IC50分别为13.80μgml-1和13.62μgml-1（P＞0.05），但是在阿霉素存在情况下，青蒿琥酯对K562/A02细胞的IC50为2
8、.64μgml-1，差异非常显著（P＜0.01），说明青蒿琥酯可以逆转K562/A02细胞对阿霉素的耐药，两
