青蒿琥酯逆转k562-a02细胞对阿霉素耐药性机

青蒿琥酯逆转k562-a02细胞对阿霉素耐药性机

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1、青蒿琥酯逆转K562/A02细胞对阿霉素耐药性机[摘要]目的:研究青蒿琥酯逆转K562/A02细胞对阿霉素的耐药性及其作用机制。方法:以对阿霉素敏感的K562细胞作为对照,用MTT法观察在有或无阿霉素存在条件下青蒿琥酯对培养的K562/A02细胞干预48h后的生长抑制情况,流式细胞仪检测100μg・ml-1青蒿琥酯作用48h前后K562/A02细胞P糖蛋白(Pgp)平均荧光强度(MFI)的强弱,生化方法检测100μg・ml-1青蒿琥酯作用48h前后K562/A02细胞内谷胱甘肽(GSH)的含量。结果:(1)在不

2、含阿霉素情况下,青蒿琥酯对K562及K562/A02细胞的IC50分别为13.80μg・ml-1和13.62μg・ml-1(P>0.05),在阿霉素存在情况下,青蒿琥酯对K562/A02细胞抑制作用明显增加(P<0.01);(2)与K562细胞Pgp的表达相比,K562/A02细胞Pgp高表达,青蒿琥酯处理前后K562/A02细胞的MFI无差别(P>0.05);(3)青蒿琥酯处理后K562/A02细胞内GSH含量较处理前明显下降(P<0.05)。结论:青蒿琥酯对K562及K562/A02细胞具有细胞毒作用,且可

3、逆转K562/A02细胞对阿霉素的耐药,其机制可能是通过干扰细胞内GSHGSHs转移酶系统功能的发挥,而非对Pgp表达的影响。[关键词]青蒿琥酯;多药耐药;K562/A02细胞;谷胱甘肽多药耐药(multidrugresistance,MDR)是指肿瘤细胞对一种化疗药物出现耐药的同时,对其他结构不同、作用靶位不同的化疗药物亦产生抗药性,是肿瘤化疗失败和复发的根源。目前寻找低毒、高效的耐药逆转剂已经成为肿瘤治疗研究的方向。K562/A02细胞是经阿霉素逐步诱导、具有MDR表型的稳定细胞系。我们在研究青蒿琥酯抗肿瘤的过程中发现,K562/A0

4、2细胞同K562细胞一样均对青蒿琥酯敏感,并且青蒿琥酯的存在可逆转K562/A02细胞对阿霉素的耐药性,其不影响K562/A02细胞Pgp的表达而显著降低K562/A02细胞内谷胱甘肽(GSH)的含量,现报道如下。1材料和方法1.1细胞系及细胞培养人红白血病细胞株K562及K562/A02细胞由东南大学临床医学院中心实验室提供。K562细胞接种于含10%小牛血清的RPMI1640培养液,K562/A02细胞接种于含2μg・ml-1阿霉素、10%小牛血清的RPMI1640培养液,置于37℃、5%CO2培养箱中,2~3d传代1次

5、。1.2主要药物及试剂青蒿琥酯(广西桂林制药二厂,批号010901),临用前溶于5%的NaHCO3溶液中,然后用RPMI1640培养液稀释;四氮唑蓝(MTT,Gibco公司);二甲基亚砜(DMSO,Sigma公司);Pgp单抗(PEUIC2美国Coulter公司);GSH测定试剂盒、考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)。1.3青蒿琥酯对K562及K562/A02细胞增殖的影响取对数生长期K562及K562/A02细胞,调细胞浓度为1.0×105ml-1。青蒿琥酯分别用含10%小牛血清的RPMI1640培养液及含2μg

6、539;ml-1阿霉素、10%小牛血清的RPMI1640培养液稀释,作用终浓度依次为100、50、25、12.5、6.25、3.125μg・ml-1。将各浓度青蒿琥酯分别与0.1ml培养细胞加入96孔平底培养板中,每组样本设5个复孔。37℃、5%CO2饱和湿度下培养48h。在终止培养前4h每孔加入MTT20μl(5mg・ml-1),继续培养4h后离心10min,弃上清液,加入DMSO150μl,放在平板振荡器上振荡溶解甲10min;将培养板置ELSA酶标仪在570nm波长处测每孔的光密度(OD)值并记录。计算抑

7、制率并利用何尔恩法[1]计算半数抑制浓度(IC50)。抑制率=(1-实验组OD/对照组OD)×100%。1.4青蒿琥酯对K562/A02细胞Pgp表达的影响无菌收集对数生长期的K562及K562/A02细胞,细胞浓度为2×106ml-1。PBS洗涤,PEUIC24℃避光反应30min,PBS洗涤后重悬,流式细胞仪检测细胞Pgp平均荧光强度(MFI),设不加PEUIC2组作为自身阴性对照。K562/A02细胞经100μg・ml-1青蒿琥酯处理48h后无菌收集,配成浓度为2×106ml-1的细胞悬液。按上述方法测Pgp的MFI。

8、1.5青蒿琥酯对K562/A02细胞内GSH含量的影响取对数生长期K562及K562/A02细胞,调细胞浓度为1.0×105ml-1,分为K562细胞无药组、K562/A02细胞无药组及K56

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