b超在测定不同方法消毒的骨形成蛋白成骨诱导活性中的意义论文

《b超在测定不同方法消毒的骨形成蛋白成骨诱导活性中的意义论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、B超在测定不同方法消毒的骨形成蛋白成骨诱导活性中的意义论文赵廷宝范清宇张殿忠文艳华何一成【关键词】超声检查,.freelorpho-geicprotein，BMP）成骨诱导活性的意义，为BMP成骨诱导活性的测定提供一种新方法.方法将自行提取的牛BMP（bBMP）分别经环氧乙烷熏蒸消毒和10000Gyγ-射线照射消毒后埋入小鼠右、左后腿肌袋内，于术后3，5，7，14.freelorphogeicproteins;osteogenesis;vl-trasonogrophyAbstract:AIMInordertoi

2、nvestigatethesignificanceofB-modeultrasoundfordeterminationofboneinductionactivityofbonemorphogeniticprotein（BMP）andtosearchforaneethodtodeterminatetheactivity.METHODSSelf-pre-paredbovinebonemorphogeicprotein（bBMP）sterilizedbyenthleneoxideandγ-rayeusclesofth

3、ebehindrightandleftlegofthemousere-spectively.Theplace-inedodeultrasound，X-rayandhistologicallyat3，5，7，14，21and28daysaftertheoperationrespectively.RESULTSNoneodeultrasoundandX-rayat3，5，7，14daysandtheneberofmesenchymalcellsusclesinalbonesthatthereinativeresul

4、tsofB-modeultrasound，X-rayandhisto-logicalsectione.SoitseemsfeasiblethatB-modeultrasoundisregardedasaneethodtodeter-minetheboneinductionabilityofbBMP.ItissaferandmoreconvenientforbBMPsterilizedbyγ-ray.0引言国内已有多家单位掌握了骨形成蛋白（bonemorphogeicprotein，BMP）的提取技术，这使BMP

5、的广泛研究和应用成为可能.但是BMP提取工序繁杂，生产条件限制颇多，所得到的BMP不是每批次都有成骨诱导活性，故供研究或应用前均须行生物学活性测定.目前常用的测定方法是X射线照相和组织形态学观察.我们根据B型超声的工作原理，试行将其引入到BMP成骨诱导活性的测定，得到了令人满意的结果，从而为BMP的研究和应用提供了一种新的活性测定方法，丰富了其检测手段.1材料和方法1.1材料取健康雄性小鼠24只（第四军医大学动物中心提供），体质量25～30g.1.2方法1.2.1bBMP的提取与消毒保存按金岩等［1］介绍的改良

6、Urist等［2］方法，取新鲜牛四肢长骨的皮质骨，粉碎成直径1mm的骨颗粒，依次经11甲醇/氯仿、0.6molL-1盐酸、2molL-1氯化钙、0.5molL-1乙二胺四乙酸二钠、8molL-1氯化锂、6molL-1尿素+0.5molL-1氯化钙+10mmolN-乙基马来酰亚胺透析、离心，4molL-1盐酸胍+0.05molL-1氯化钙、0.25molL-1柠檬酸缓冲液透析、离心等处理后，得到成骨诱导活性较高的粗提bBMP，分别用环氧乙烷和60Coγ-射线10000Gy照射消毒，置-80℃冰箱保存备用.1.2.

7、2bBMP成骨诱导活性的测定随机将小鼠分为实验组18只和对照组6只.实验组于每只小鼠（行戊巴比妥钠10mLkg-1，ip麻醉）两侧后腿股部埋入等量的（5mg）bBMP，右侧为环氧乙烷消毒者，左侧为γ-射线消毒者.对照组做空白对照.分别于术后3，5，7，14，21和28d行B超、X射线照相和组织形态学观察.B超:致死量麻醉下（行戊巴比妥钠50mLkg-1，ip，下同），将小鼠四肢伸展，仰卧位固定于泡沫板上，在bBMP植入部位行B超检查，随后取材.X射线照相:麻醉同上，俯卧位，四肢自然伸展摄X线片，随后取材.组织形

8、态学观察:致死量麻醉后随即取材.对照组:致死量麻醉下，先行B超检查，再行X射线照相并取材.以上取材后的组织，经戊二醛固定24～48h，盐酸脱钙24h后碳酸锂中和，经梯度乙醇脱水，石蜡包埋切片，HE染色，光镜下观察.2结果2.1B超对照组均为正常组织回声.实验组3，5和7d的B超回声与对照组相同.14d，在bBMP植入部位产生弱的回声，21和28d回声增强（Fig1）.在此时间段内，回声