b超在测定不同方法消毒的骨形成蛋白成骨诱导活性中的意义

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1、B超在测定不同方法消毒的骨形成蛋白成骨诱导活性中的意义摘要:目的探讨B超在测定骨形成蛋白（bonemorpho-geicprotein，BMP）成骨诱导活性的意义，为BMP成骨诱导活性的测定提供一种新方法.方法将自行提取的牛BMP（bBMP）分别经环氧乙烷熏蒸消毒和10000Gyγ-射线照射消毒后埋入小鼠右、左后腿肌袋内，于术后3，5，7，14，21和28d行B超、X射线照相和组织形态学观察.结果B超3，5和7d与对照组相同，均为正常组织回声，14，21和28d有软骨和骨组织回声，在此时间段内随时间延长回声增强.X射线

2、照相3，5，7和14d无骨组织影像，21，28d有明显的新生骨征象.组织形态学观察3，5，7d有大量间充质细胞在BMP植入部位聚集，并诱导间充质细胞分化为成软骨细胞，14d有新生软骨和新生骨组织形成，21，28d可见大量的新生的成熟骨组织.环氧乙烷熏蒸和10000Gyγ-射线照射消毒的bBMP均有很强的成骨诱导活性.结论B超、X射线照相和组织形态学观察结果在时间上有很强的一致性，证明B超作为一种新的BMP成骨诱导活性的检测手段是切实可行的.γ-射线照射消毒BMP更方便、更安全.　　Keyorphogeicprotein

3、s;osteogenesis;vl-trasonogrophy　　Abstract:AIMInordertoinvestigatethesignificanceofB-modeultrasoundfordeterminationofboneinductionactivityofbonemorphogeniticprotein（BMP）andtosearchforaneethodtodeterminatetheactivity.METHODSSelf-pre-paredbovinebonemorphogeicprotei

4、n（bBMP）sterilizedbyenthleneoxideandγ-rayeusclesofthebehindrightandleftlegofthemousere-spectively.Theplace-inedodeultrasound，X-rayandhistologicallyat3，5，7，14，21and28daysaftertheoperationrespectively.RESULTSNoneodeultrasoundandX-rayat3，5，7，14daysandtheneberofmesen

5、chymalcellsusclesinalbonesthatthereinativeresultsofB-modeultrasound，X-rayandhisto-logicalsectione.SoitseemsfeasiblethatB-modeultrasoundisregardedasaneethodtodeter-minetheboneinductionabilityofbBMP.ItissaferandmoreconvenientforbBMPsterilizedbyγ-ray.　　0引言　　国内已有多家单

6、位掌握了骨形成蛋白（bonemorphogeicprotein，BMP）的提取技术，这使BMP的广泛研究和应用成为可能.但是BMP提取工序繁杂，生产条件限制颇多，所得到的BMP不是每批次都有成骨诱导活性，故供研究或应用前均须行生物学活性测定.目前常用的测定方法是X射线照相和组织形态学观察.我们根据B型超声的工作原理，试行将其引入到BMP成骨诱导活性的测定，得到了令人满意的结果，从而为BMP的研究和应用提供了一种新的活性测定方法，丰富了其检测手段.　　1材料和方法　　1.1材料取健康雄性小鼠24只（第四军医大学动物中心提

7、供），体质量25～30g.　　1.2方法　　1.2.1bBMP的提取与消毒保存按金岩等［1］介绍的改良Urist等［2］方法，取新鲜牛四肢长骨的皮质骨，粉碎成直径1mm的骨颗粒，依次经11甲醇/氯仿、0.6molL-1盐酸、2molL-1氯化钙、0.5molL-1乙二胺四乙酸二钠、8molL-1氯化锂、6molL-1尿素+0.5molL-1氯化钙+10mmolN-乙基马来酰亚胺透析、离心，4molL-1盐酸胍+0.05molL-1氯化钙、0.25molL-1柠檬酸缓冲液透析、离心等处理后，得到成骨诱导活性较高的粗提bB

8、MP，分别用环氧乙烷和60Coγ-射线10000Gy照射消毒，置-80℃冰箱保存备用.　　1.2.2bBMP成骨诱导活性的测定随机将小鼠分为实验组18只和对照组6只.实验组于每只小鼠（行戊巴比妥钠10mLkg-1，ip麻醉）两侧后腿股部埋入等量的（5mg）bBMP，右侧为环氧乙烷消毒者，左侧为γ-射线消毒者.对照组做空白对照.