莫西沙星壳聚糖滴眼液的研制论文

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1、莫西沙星壳聚糖滴眼液的研制论文.freelineA（水解酪素）0.2%，pH7.3。种子及发酵培养基蔗糖2%，饴糖1%，蛋白胨（血）0.2%，啤酒酵母粉0.5%，NaNO30.1%，黄豆粉1%，pH7.0。1.2仪器与试剂X5型大孔吸附树脂（天津南开大学化工厂），100～200目柱色谱用硅胶H60（青岛海洋化工厂），中压ODS/C18柱（ULTRAPACKODS30/50（15mm×300mm，5μm），旋转蒸发仪（BüCHI-011，SadzuLC-10Avp，柱型号为InertsilODS-2（4.6mm×150mm，5μm），紫外光谱仪（Shi-madzuUV-22

2、01），红外光谱仪（NicoletImpact400FR-IR），质谱仪（AccuTofCSLCMS），核磁共振仪（BrukerAM-500）。2.1活性跟踪方法以精原细胞法结合平行菌法（金葡菌209P）对分离过程进行活性跟踪，表1为在筛选分离活性物质过程中各重要步骤测活数据，其中的各个组分均有杀精原细胞活性。2.2发酵以在B斜面培养基上28℃培养10d的链霉菌表1发酵液（pH8.0）21发酵液（pH7.0）21X5柱50%丙酮洗脱部分25乙酸乙酯萃取部分29硅胶柱甲醇洗脱部分284209-23A纯品304209-23作为菌种，接种于种子培养基中（1支斜面种2瓶种子，80

3、ml/500ml），28℃振荡培养48h，然后转种于发酵培养基中（2瓶种子转种1瓶立瓶，700ml/5000ml），28℃来回摇床培养96h，此时生物活性最高。2.3提取分离与纯度鉴定将11L发酵液过滤，滤液调pH至7.0后通过X5型大孔吸附树脂，弃去流出液，用50%丙酮洗脱，收集洗脱液并挥去丙酮，用乙酸乙酯萃取，并通过旋转蒸发仪浓缩萃取液得到粗品。用少量乙酸乙酯溶解粗品，上样于硅胶H柱，梯度洗脱，洗脱液分别为乙酸乙酯200ml，乙酸乙酯:甲醇（1∶1）200ml，甲醇400ml。收集并浓缩甲醇洗脱部分，以45%甲醇∶水溶解，上样于ODS/C18反相中压柱，以45%甲醇∶

4、水系统洗脱，得一灰黑色成分，冻干后为4mg。经HPLC检测，流动相为50%甲醇∶水（含0.05%TFA），检测波长215nm，柱温30℃，得到单一对称峰，保留时间为11.605min。2.4理化性质及结构鉴别4209-23A为灰黑色无定形粉末，熔点:272～274℃，易溶于二氧六环、吡啶、二甲基甲酰胺，可溶于甲醇、丙酮，微溶于苯、二氯甲烷、乙醚。UVλMeOH（nm）:203，245，386。红外光谱:υKBr（cm-1）:3450及3348的两个尖锐强峰为υN-H振动，1684cm-1为共轭的羧酸的羰基振动，1610cm-1为苯环的骨架振动。ESI-MS（positiv

5、e）:m/z507［M+H］，528［M+Na］，分子量为506，又由HRMS:m/z507.15214［M+H］确定分子式为C25H22N4O8。根据氢谱及DEPT谱可知，该化合物有1个CH3，3个OCH3，4个CH，其中低场的2个CH互相偶合，偶合常数8Hz，说明在芳香环上。另外2个低场的H在氢谱上重叠于一起，形成一个尖锐的单峰，与文献［2］比较可知，该化合物用DMSO-d6溶解做谱时，这两个氢化学位移近乎一致;而用CDCl溶解做谱时则可分开且有一定的偶合常数。根据D2O交换氢谱可知最低场的一个H及化学位移为6.850的H为活泼氢，另外羧基上的活泼H在该谱上没有显示（

6、表2）。然后根据HMQC确定与H直接所连的C的化学位移，结合HMBC推断结构，与文献［2，3］相对照，可知该化合物即为链黑菌素，其结构如图1。3讨论链霉菌4209-23是经过精原细胞法检测约2000个放线菌发酵液筛选得到的活性菌株之一，经过分类鉴定为一链霉菌新种，其发酵过程受外界温度影响较大，发酵不稳定，易染菌，代谢产物复杂且各成分含量较小。化合物链黑菌素为首次通过该模型筛选得到，具有强烈的杀精原细胞活性，其具体的化学结构研究国内未见报道，该化合物抗肿瘤活性显著，但是毒副作用1H-NMR谱中未见。较大，国外对其具体的抗肿瘤机制进行了一系列的研究［2］，因此如何改造其结构，

7、降低毒副作用，需要进一步更深入的研究。【