甲氨喋呤和雷公藤对类风湿关节炎滑膜细胞产生趋化因子的影响

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1、甲氨喋呤和雷公藤对类风湿关节炎滑膜细胞产生趋化因子的影响作者：魏锦，袁国华，周京国，蔚芃，唐中，杨明辉，张国元【摘要】目的探讨甲氨喋呤（MTX）和雷公藤多甙（TG）对类风湿关节炎（RA）滑膜细胞产生CC趋化因子受体5配体（CCL5）的影响。方法分离于11例RA和6例骨关节炎（OA）的滑膜细胞行体外培养，并用细胞脂多糖（LPS）诱导CCL5产生，同时加入或不加入不同浓度的MTX或TG。采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定培养上清液中的CCL5水平。结果RA滑膜细胞体外自发产生CCL5水平高于OA滑膜细胞（P<0.05）；LPS刺激后，RA和OA

2、滑膜细胞产生CCL5水平均较刺激前显著升高（P均<0.001），但二者间差异无显著性（P>0.05）；MTX和TG均可显著抑制RA滑膜细胞产生CCL5，但二者抑制方式不同：MTX剂量在5～20ng/ml的剂量范围内呈现剂量依赖性效应，之后随剂量的增大，其抑制作用不再进一步增强。而TG未显示出剂量依赖性抑制效应，仅在剂量达到或超过60ng/ml时出现比MTX更显著的抑制作用。进一步分析发现，TG抑制CCL5产生与其所致的滑膜细胞死亡相关。结论RA滑膜细胞产生CCL5增高，MTX和TG均可显著抑制CCL5的产生，其中TG抑制CCL5产生与其

3、细胞毒作用有关。【关键词】关节炎类风湿趋化因子受体5配体滑膜细胞TheinhibitoryeffectsofmethotrexateandtripterygiumglycosidesonchemokineCCL5productioninsynoviocytesfrompatientsatoidarthritis【Abstract】ObjectiveTodeterminetheinhibitoryeffectsofmethotrexate(MTX)andtripterygiumglycosides(TG)onchemokineCCL5producti

4、oninsynoviocytesisolatedfrompatientsatoidarthritis(RA).MethodsSynoviocytes，isolatedfromRApatientsandpatientsulatedeasuredbyenzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA).ResultsRAsynoviocytesspontaneouslyproducedhigherlevelofCCL5thanOAsynoviocytesdid.BothMTXandTGannerintheconcentratio

5、nrangedfrom0-20ng/ml.TXandTGmightbeexistedthroughthEiranti-CCL5effect.【KeyatoidchemokinesCCCCL5　　类风湿关节炎（RA）是一种常见的慢性炎性关节炎，其病理特征为大量炎性细胞在滑膜的浸润和在滑液的渗出，及由此导致的滑膜增生，血管翳形成，最终造成关节软骨破坏。近期的研究结果显示，趋化因子（chemokine）在RA的炎性细胞关节浸润中起着极为重要的作用［1］。我们发现RA患者血清和滑液CC趋化因子受体5（CCR5）的配体CCL5（RANTES）水平增高，并证实

6、滑膜细胞是其产生的主要部位，并且在用甲氨喋呤（MTX）和雷公藤多甙（TG）治疗后，CCL5水平下降［2，3］。为了进一步探讨MTX和TG在RA滑膜细胞产生CCL5的作用，我们通过体外滑膜细胞培养方法，观察MTX和TG对RA滑膜细胞产生CCL5的影响。1资料与方法1.1一般资料在本院就诊的、有膝关节积液的RA患者11例，男3例，女8例，年龄21～68岁，平均年龄41岁，病程6个月～18年，平均7.4年。所有病人均符合美国风湿病学会1987年的RA诊断标准［4］，且近1个月内未用改变病情药物（DMARD）和甾体类激素。另选择有膝关节积液的OA患者6例作

7、为对照组，其中男2例，女4例，年龄42～78岁，平均年龄49.3岁，病程2.6～12年，平均9.3岁。1.2滑膜细胞的分离与培养实验采用滑液中的游离滑膜细胞进行培养。患者在无菌条件下行膝关节穿刺，抽取关节液后，在4℃1000r/min离心10min，去上清后用无菌冷PBS10ml悬浮细胞，经100目尼龙网过滤去除凝块沉渣，细胞再用冷PBS洗2次后，悬浮于DMEM培养液（含10%小牛血清，100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素），混匀后取10ml行台盼蓝染色，活细胞计数。收集到的细胞接种于培养皿，置CO2自动控制培养箱，于37℃培养12h后，更

8、换培养液去除非粘壁细胞，重复2～3次，至显微镜下观察绝大部分细胞呈梭状成纤维样细胞为止。用胰蛋白酶法收集滑膜细胞，按105