高效液相色谱法测定葛根、红花和山楂混合提取物中葛根素、羟基红花黄色素a的含量论文

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1、高效液相色谱法测定葛根、红花和山楂混合提取物中葛根素、羟基红花黄色素A的含量论文李桥，宋恬，王光忠，刘焱文【摘要】目的建立一种反相高效液相色谱方法，测定葛根、山楂、红花混合提取物中葛根素和羟基红花黄色素A的含量。方法采用HypersilODS4.6mm（i..d.）×250mm，5μm，以0.2％（V/V）磷酸水溶液∶甲醇∶乙腈（81∶16∶3）为流动相，流速1.2ml/min.freel，测葛根素和羟基红花黄色素A。结果葛根素和羟基红花黄色素A线性范围分别为0.032406～0.16208mg/ml和0

2、.0294～0.147mg/ml;平均加样回收率分别为98.3％，98.0％;RSD分别为1.2％，1.6％。结论该方法快速、简便、准确，可为评价该提取物的质量提供依据。【关键词】葛根素羟基红花黄色素A高效液相色谱法Abstract：Objective：ToestablishanRP-HPLCmethodforthedeterminationofthecontentofPuerarinandHSYAintheextractsfromRadixPuerariae,FructusCrataegiandCart

3、hamustintorius.MethodsTheHPLCsystemconsistedofHypersilODScolumn(250mm×4.6mm,id5μm)ethanol:acetonitrile(81:16:3)mixtureasmobilephase,.freell/min,thedetectionrespectivelyfordeterminationofPuerarinandHSYA,andthecolumntemperatureg/mland0.0294～0.147mg/mlrespec

4、tively,theaveragerecoveriesofaddingsampleethodissimple,fastandaccurate.ItcanbeusedforthequalitycontroloftheextractsofRadixPuerariae,FructusCrataegiandCarthamustintorius.Keystation数据处理系统（美国Agilent公司）;BP211D电子天平（sartorius公司）；葛根素，羟基红花黄色素A对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测

5、定用）；试剂均为分析纯，甲醇（上海振兴化工一厂），乙腈（国药集团化学试剂有限公司），磷酸（武汉化学试剂厂）；实验室用水为自制双蒸水。葛根、红花、山楂提取物（实验室自制批号20070621，20070712，20070823）。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：HypersilODS4.6mm（i..d.）×250mm，5μm；流动相：0.2％（V/V）磷酸水溶液∶甲醇∶乙腈（81∶16∶3）；检测波长250nm（测葛根素），403nm（测羟基红花黄色素A）；流速1.2ml/min;柱温25℃，进样量10μ

6、l。2.2对照品溶液的制备称取葛根素、羟基红花黄色素A适量，加40％的乙醇配成浓度分别为0.081，0.147/mg·ml-1对照品溶液，密封置冰箱保存。2.3供试品溶液的制备称取提取物粉末约0.06g，精密称定，加40％的乙醇定容至100ml。取上述溶液适量过0.45μm滤膜，制成供试品（测葛根素样品）;另称取提取物粉末约0.68g，精密称定，加40％的乙醇定容至50ml。取上述溶液适量过0.45μm滤膜，制成供试品（测羟基红花黄色素A样品）。2.4方法学考察2.4.1线性关系考察葛根素线性关系：分别吸

7、取浓度为（mg/ml）：0.03246，0.064862，0.0097248，0.129664，0.16208葛根素对照品溶液10μl，进样记录色谱峰峰面积，以进样浓度（mg/ml）作为纵坐标，吸收峰面积为横坐标，得回归方程：C＝3×10-5A＋0.0025（r＝0.9999）。结果表明葛根素在32.406～162.08μg/ml范围内线性关系良好。羟基红花黄色素A线性关系：分别吸取浓度为（mg/ml）0.0294，0.0588，0.0882，0.1176，0.147羟基红花黄色素A对照品溶液10μl，进

8、样记录色谱峰峰面积，以进样浓度（mg/ml）作为纵坐标，吸收峰面积为横坐标，得回归方程：C＝5×10-5A＋0.0022（r＝0.9999）。结果表明葛根素在29.4～147μg/ml范围内线性关系良好。2.4.2稳定性考察分别精密吸取样品供试液在8h内每隔2h测定1次，每次进样量为10μl，测得样品中葛根素峰面积的RSD为0.80%（n＝5）;羟基红花黄色素A峰面积的RSD为0.59％（n＝5）。2.4.3精密度考察分别吸取