高效液相色谱法测定桃仁红花配伍药对中羟基红花黄色素a含量的变化论文

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1、高效液相色谱法测定桃仁红花配伍药对中羟基红花黄色素A含量的变化论文张荣，王涛，刘启德，陈少洁【摘要】【目的】观察桃仁红花不同配伍比例(质量比分别为1∶1、1∶2、1∶3)在水煎液环境中对羟基红花黄色素A(HSYA)含量的影响。【方法】采用反相高效液相色谱(RPHPLC)法，色谱柱为LunaC18柱(46mm×150mm，5μm)，以甲醇012mmol/L磷酸水溶液(28∶72)为流动相，检测波长403nm.freelL/min，柱温30℃。【结果】HSYA在40～1600μg/mL浓度范围内线性关系良好，其回归方程Y=25396X+40247(r=09997)，平均加样回收

2、率为9476%，相对标准偏差(sR)为293%。HSYA含量基本随着红花用量比例的增加而呈相应倍数递增，与桃仁用量无明显关系。【结论】本研究建立的HSYA含量测定方法简便准确，重复性好，可用于红花药材及其复方制剂质量标准的控制，桃仁对HSYA的溶出无明显影响。【关键词】桃仁/化学;红花/化学;羟基红花黄色素A/分析;色谱法，高压液相菊科植物红花(CarthamustinctoriusL.)是新兴的油料作物，其干燥的管状花称为红花(也叫草红花、红花绒、红花丝等)，是传统的活血化瘀中药。现代药理学研究表明红花具有抗凝血、抗血栓、降血压、降血脂等功效，在治疗脑血栓、脑溢血、冠心病、高血压等

3、心脑血管疾病方面疗效显著1-2。桃仁为蔷薇植物桃Prunuspersica(L)batsch的种子,其性平味甘苦,具有活血祛瘀、润肠通便之功，常用于经闭、痛经、癥瘕痞块、跌打损伤、肠燥便秘等症。桃仁红花配伍是中药方剂应用中的常见药对之一，经考察中药复方2477种药方，两者配比关系为1∶1者占569%，1∶2者占118%，2∶3者占137%,其他占176%3-4。红花中查耳酮苷类化合物—羟基红花黄色素A(hydroxysaffloryelloustinctoriusL.的干燥花，桃仁为蔷薇科植物桃Prunuspersica(L.)Batsch的干燥成熟种子;磷酸等其他试剂均为市售

4、分析纯(广州化学试剂公司)。2方法与结果21色谱条件色谱柱为LunaC18柱(150mm×46mm，5μm);流动相为甲醇—012mmol/L磷酸水溶液(体积比28∶72);流速10mL/min;检测波长403nm;柱温30℃;进样量5μL。22对照品贮备液的配制精密称取HSYA标准对照品200mg于100mL棕色容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得020mg/mL的HSYA标准储备液，置4℃冰箱避光保存。临用前用蒸馏水稀释到所需浓度。23供试品溶液的制备6分别精密称取桃仁—红花(质量比1∶1)02g，桃仁—红花(质量比1∶2)03g，桃仁—红花(质量比1

5、∶3)04g，分别置于50mL圆底烧瓶中，精密加入12mL蒸馏水，回流加热提取40min，稍冷后过滤于25mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，045μm微孔滤膜过滤，取续滤液5μL进样检测分析。24阴性样品液的制备取桃仁药材约01g，按23项下方法制成桃仁单煎阴性样品液。25系统适用性试验精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品液各5μL，在上述选定的色谱条件下分别进样测定，HPLC色谱图见图1。结果HSYA的保留时间约在125min，峰分离度良好，阴性样品液无干扰。26标准曲线的制备精密吸取HSYA对照品储备液01、025、05、10、20、40mL,分

6、别置于5mL棕色容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀。各精密吸取5μL注入液相色谱仪中，按照上述选定色谱条件测定，以色谱峰面积为纵坐标，HSYA浓度为横坐标进行线性回归，其回归方程为Y=25396X+40247，r=09997，HSYA在40～1600μg/mL的浓度范围内线性关系良好。27精密度实验精密吸取HSYA对照品溶液5μL，连续进样6次，记录色谱图，测得HSYA的峰面积相对标准偏差(sR)为250%，结果表明精密度良好。28重复性实验精密称取桃仁、红花药材各01g，平行6份，按23项下方法制备供试品溶液，5μL进样检测分析，煎液中HSYA含量的sR为167%，表

7、明实验重复性良好。29稳定性实验取同一份供试品溶液，分别于0、1、2、4、6、8h进样测定，HSYA峰面积sR为168%，表明供试品溶液至少在8h内具有良好的稳定性。210加样回收率试验精密称取已知含量的同一批号红花样品6份，分别加入一定量的外源HSYA对照品，按23项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样5μL，记录色谱峰，计算回收率。结果见表1。211样品的测定取3种供试品溶液5μL进样，测得HSYA峰面积并代入回