高效液相色谱法测定五虎散中 羟基红花黄色素a的含量论文

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1、高效液相色谱法测定五虎散中羟基红花黄色素A的含量论文【摘要】目的建立复方制剂五虎散中红花有效成分的高效液相色谱测定方法。方法采用AgilentC18(5μm，250mm×4.60mm)色谱柱；以甲醇-0.4%磷酸水（33∶67）为流动相，流速为1ml·min-1，检测波长为402nm。结果羟基红花黄色素的线性范围分别为0.0565～0.452μg(r=0.9994),平均加样回收率(n=6)为99.15%，RSD为4.51%。结论该测定方法简便可行、重复性好，可用于该制剂中红花有效成分的含量测定。【关键词】五虎散；羟基红花黄色素；高效液相色谱Abstract：Obj

2、ectiveToestablishthemethodfordeterminationofeffectiveponentsinusingfollon,250mm×4.60mm),okilephase,theflol·min-1,thedetection.ResultsThelinearrangeofhydroxysaffloryelloethodissimple,accurate,highlyselectiveandreproducible,thusitcanbeusedasqualitycontrolofpoundm×4.6mm）；流动相：甲醇-0.4%磷酸水溶液（

3、33∶67）；流速为1ml·min-1，检测波长为402nm；柱温：室温；进样量10μl。在该色谱条件下，羟基红花黄色素A能够达到基线分离，其他成分对测定无干扰。结果见图1。2.2样品的制备2.2.1供试品溶液的制备精密称取五虎散粉约1g，置于10ml具塞三角瓶中，准确加入pH为2的95%乙醇5ml，称重，超声30min，室温放置20min后，以pH为2的95%乙醇补足损失的重量，摇匀，过滤。取续滤液过0.45μm微孔滤膜，即得。a-对照品羟基红花黄色素Ab-五虎散样品c-缺红花阴性样品图1羟基红花黄色素A的HPLC图谱2.2.2对照品溶液的制备精密称取对照品羟基红

4、花黄色素A适量，配制成每毫升中含羟基红花黄色素A0.565mg的对照品溶液。2.3线性关系分别吸取对照品溶液1，2，4，6，8μl注入高效液相色谱仪，按色谱条件测定。以各对照品进样量(Y)对峰面积(X)进行线性回归处理，结果显示，羟基红花黄色素A进样量在0.0565～0.452μg范围呈线性关系，回归方程为Y=1870X+12.57，相关系数r=0.9994。2.4精密度实验精密吸取上述对照品溶液5μl，连续进样6次，测得羟基红花黄色素A峰面积平均值为536.95，RSD为3.52%。表明分析方法精密度良好。2.5稳定性实验精密吸取同一供试品溶液10μl分别在0，1

5、，3，4，5，6h按上述色谱条件测定6次，结果羟基红花黄色素A的平均峰面积为0.2804,RSD为3.60%。表明供试品溶液在6h内稳定性良好。2.6重复性实验取同一批号样品（20030801），按供试品溶液制备项下操作，平行制备6份，按色谱条件测定百分含量(%)，羟基红花黄色素A的平均含量为0.1641mg·g-1，RSD为5.0%。表明分析的重复性良好。2.7加样回收率实验精密称取已知含量的五虎散粉（20030801）0.5g，分别精密加入一定量的羟基红花黄色素A对照品，按供试品溶液制备项下操作，重复操作6份，按色谱条件测定含量，计算回收率。结果见表1。表1羟基

6、红花黄色素A回收率实验结果3样品测定精密称取活血通络片粉约1g(同一批号称取3个样品，然后算出平均值作为结果)，按样品制备方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液4μl与样品供试液各10μl，按上述拟定的色谱条件测定，结果见表2。表2样品测定结果mg·g-14讨论本实验曾采用乙腈-水系统、甲醇-水系统的不同梯度为流动相，结果以文中条件分离效果好，重现性强，被检成分均达到基线分离，理论塔板数均在10000以上。该分析方法是在《中国药典》收载的红花含量测定方法［1］上加以改进的方法。但我们注意到在该分析过程中，应注意控制柱温在25℃。柱温过高将影响羟基红花黄色素A分离

7、度与峰的对称性。羟基红花黄色素A受热不稳定，故该提取方法宜采用短时间超声提取。实验发现超声时间过长，羟基红花黄色素A的含量下降显著。同时由于各批次原药材的有效成分含量不同，引起成品含量的波动，我们应在生产前，严格控制原药材的质量与含量。【