高效液相色谱法测定五虎散中 羟基红花黄色素a的含量_论文

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1、高效液相色谱法测定五虎散中羟基红花黄色素A的含量【摘要】目的建立复方制剂五虎散中红花有效成分的高效液相色谱测定方法。方法采用AgilentC18(5μm，250mm×mm)色谱柱；以甲醇-%磷酸水（33∶67）为流动相，流速为1ml·min-1，检测波长为402nm。结果羟基红花黄色素的线性范围分别为5～μg(r=4),平均加样回收率(n=6)为%，RSD为%。结论该测定方法简便可行、重复性好，可用于该制剂中红花有效成分的含量测定。【关键词】五虎散；羟基红花黄色素；高效液相色谱Abstract：ObjectiveToestablishthemethodfordeterminati

2、onofeffectivecomponentsinWuhupowderbyRP-HPLC.MethodsThecontentsofhydroxysaffloryellowAwasdeterminedbyanHPLCsystemusingfollowingconditions:thecolumnwasAgilentC18(5μm,250mm×mm),with%H3PO4watersolution（33:67）asmokilephase,theflowratewasml·min-1,thedetectionwavelengthwasat402nm.ResultsThelinearra

3、ngeofhydroxysaffloryellowAwas5～μg（r=4）;itsaveragerecoverywere%,5/5correspondingRSDwere%.ConclusionTheHPLCmethodissimple,accurate,highlyselectiveandreproducible,thusitcanbeusedasqualitycontrolofCompoundWuhupowder.Keywords:Wuhupowder;HydroxysaffloryellowA;HPLC五虎散是《中国药典》收载的品种，由当归、红花、防风、天南星（制）和白芷

4、等5味中药组成，具有活血散淤、消肿止痛作用，用于跌打损伤、淤血肿痛等。法定标准［1］中仅收载了显微鉴定和当归、白芷的TLC定性鉴别。未有含量测定标准。该制剂的疗效确切，在医院广泛使用。为建立五虎散的含量测定方法,笔者采用了HPLC法测定五虎散中羟基红花黄色素A，并对其含量测定方法进行了系统研究，现报道如下。1器材仪器BS124S型电子分析天平（德国Sartorius）；Agilent1100型高效液相色谱仪。试剂甲醇（色谱纯，Merck公司），超纯水，甲醇（分析纯）。样品五虎散（医院制剂室生产，批号为2017080120170803共两批）。5/5对照品羟基红花黄色素A　(批号∶

5、111637-201702)，对照品购自中国药品生物制品检定所。2方法与结果AgilentC18柱（5μm，250mm×mm）；流动相：甲醇-%磷酸水溶液（33∶67）；流速为1ml·min-1，检测波长为402nm；柱温：室温；进样量10μl。在该色谱条件下，羟基红花黄色素A能够达到基线分离，其他成分对测定无干扰。结果见图1。样品的制备供试品溶液的制备精密称取五虎散粉约1g，置于10ml具塞三角瓶中，准确加入pH为2的95%乙醇5ml，称重，超声30min，室温放置20min后，以pH为2的95%乙醇补足损失的重量，摇匀，过滤。取续滤液过μm微孔滤膜，即得。a-对照品羟基红花黄

6、色素Ab-五虎散样品c-缺红花阴性样品图1羟基红花黄色素A的HPLC图谱对照品溶液的制备精密称取对照品羟基红花黄色素A适量，配制成每毫升中含羟基红花黄色素Amg的对照品溶液。线性关系分别吸取对照品溶液1，2，4，6，85/5μl注入高效液相色谱仪，按色谱条件测定。以各对照品进样量(Y)对峰面积(X)进行线性回归处理，结果显示，羟基红花黄色素A进样量在5～μg范围呈线性关系，回归方程为Y=1870X+，相关系数r=4。精密度实验精密吸取上述对照品溶液5μl，连续进样6次，测得羟基红花黄色素A峰面积平均值为，RSD为%。表明分析方法精密度良好。稳定性实验精密吸取同一供试品溶液10μl

7、分别在0，1，3，4，5，6h按上述色谱条件测定6次，结果羟基红花黄色素A的平均峰面积为4,RSD为%。表明供试品溶液在6h内稳定性良好。重复性实验取同一批号样品（20170801），按供试品溶液制备项下操作，平行制备6份，按色谱条件测定百分含量(%)，羟基红花黄色素A的平均含量为1mg·g-1，RSD为%。表明分析的重复性良好。加样回收率实验精密称取已知含量的五虎散粉（20170801）g，分别精密加入一定量的羟基红花黄色素A对照品，按供试品溶液制备项下操作，重复操作6份，按色