高效液相色谱法测定广西粉葛中葛根素的含量论文

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1、高效液相色谱法测定广西粉葛中葛根素的含量论文杨立芳，李小燕，罗伟强，潘洪平，邓光辉,韦冬萍【关键词】广西粉葛；,,葛根素；,,高效液相色谱法摘要：目的采用HPLC法测定广西粉葛中葛根素的含量。方法色谱柱PhenomenexGeminiC18柱（250mm×4.6mm,5μm）；流动相：乙腈(A)-0.4%磷酸水溶液(B)，采用梯度洗脱；流速：1.0ml/min；检测波长：250nm；柱温：30℃。结果葛根素在800~2400ng范围内峰面积与进样量呈良好的线性关系。回归方程为A=7.682×104C+5.885×104，r=0.9993（n=5）。其平均回收率为99.4

2、9％，RSD为0.75％(n=5)。结论该方法简便易行.freelinationofPuerarininContentinGuangxiRadixpuerariaethomsoniibyHPLCAbstract：ObjectiveTodeterminethecontentofpuerarinfromGuangxiRadixpuerariaethomsoniibyHPLC.MethodsTheisolationenexgeminiC18column(250rmm×4.6mm,5μm),themobilephaseconsistedofacetonitnle(A)-0.4%

3、phosphoricand(B)inagradientmodel,theflol/min,thedetectionandthecolumntemporatureethodissimple,.freelsonii.Keysonii；Puerarin；HPLC粉葛为豆科植物甘葛藤(PuerariathomsoniiBenth)的干燥根。收载于《中国药典》各版［1］。主含异黄酮成分葛根素(Puerarin)、葛根素木糖苷(Puerarin―xyloside)、大豆黄酮（Daidzein）、大豆黄酮苷（Daidzein）及多量淀粉等［2］，具有解肌退热、生津、透疹、生阳止泻之功

4、效［3］。葛根素是粉葛药材中的主要活性成分之一，具有扩张冠状动脉，降低血压，减少心肌耗氧量；抗心率失常；降血糖，降血脂；抗动脉硬化，改善微循环；抗肿瘤等多种药理作用［4］。为此，粉葛越来越受到人们的重视。本文采用适宜的提取方法，通过HPLC法对广西不同产地粉葛中葛根素进行含量测定，可较全面地评价广西粉葛药材质量，为广西粉葛药材的开发和应用提供了实验基础。1仪器与试药美国PerkinElmerSeries200液相色谱仪；紫外检测器；葛根素对照品(中国药品生物制品鉴定所批号：110752-2004110)；乙腈为色谱纯；水为超纯水。其余试剂均为分析纯。实验所用粉葛药材（产

5、地：广西）经广西南宁食品药品检验所鉴定。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：PhenomenexGeminiC18柱（250mm×4.6mm,5μm）；检测波长：250nm；柱温：30℃；进样量：20μl；理论板数按葛根素计算不低于5000。流动相：乙腈(A)-0.4%磷酸水溶液(B)，流速：1.0ml/min。采用梯度洗脱，程序：0~5minA/B（0：100）；5~25minA/B（11：89）；25~40minA/B（17：83）；40~50minA/B（35：65）；50~70minA/B（78：22）。2.2对照品溶液的制备精密称取20mg葛根素对照品，用30％

6、乙醇超声5min使溶解，定容至50ml容量瓶中摇匀，即得(每毫升中含葛根素400μg)。2.3供试品溶液的制备取粉葛药材粉末约1.0g（过2号筛），精密称定，精密加入30%乙醇溶液50ml，称定重量,用超声清洗器进行超声提取1h，再次称定重量,用30%乙醇溶液补足减失的重量,然后减压过滤，取出滤液，用0.45μm水系微孔滤膜过滤，得供试品溶液。2.4系统适用性实验在“2．1”项色谱条件下，葛根素与相邻峰可达到基线分离，分离度大于4.0，理论塔板数以葛根素计算为5000，色谱图见图1。2.5线性关系考查精密称取20mg葛根素对照品，用30％乙醇溶解（需超声5min），定容

7、至50ml容量瓶中制成贮备液。分别精确量取贮备液1.00，1.50，2.00，2.50，3.00ml定容至10ml，制成葛根素含量为40.00，60.00，80.00，100.0，120.0μgml-1的标准溶液，各进样20μl，记录峰面积积分值，以峰面积积分值A对浓度C进行回归，得A=7.682×104C+5.885×104，r=0.9993（n=5）。表明葛根素在800~2400ng范围内峰面积与进样量呈良好的线性关系。2.6精密度实验精密吸取“2．5”项下的对照品溶液(80.00mgL-1)20μl，连续进样5次，测得色谱峰面积，计